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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 共表达载体只表达出一个蛋白
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30937747

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ilxly at 2012-06-06 11:08:22
petduet本来也不是一定能共表达的，只是尝试的一个手段
你可以更换下AB基因在MCS上的顺序试试 只有试过了才知道行不行

那我要全部重新设计引物酶切位点啊
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我依旧会努力.
11楼2012-06-07 17:18:16
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30937747

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zboter at 2012-06-06 11:10:34
你将两个基因的顺序对调一下呢？

那我全部要重新做
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我依旧会努力.
12楼2012-06-07 17:18:41
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30937747

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 101202139 at 2012-06-06 15:24:23
不知道楼主现在这个问题解决了吗？我之前也遇到过类似的问题，现在正在尝试不同的方法争取能够实现共表达。

没有解决.但是我发现我用连接A基因的酶做酶切,已经切不出带型了.不知道哪出了问题
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我依旧会努力.
13楼2012-06-07 17:19:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
10楼: Originally posted by 30937747 at 2012-06-07 17:17:56
共表达载体上有两个启动子两个MCS...

这种情况一般没遇到过，单独表达没问题，共表达一般都没啥问题。
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Thank-you，so-blue.
14楼2012-06-07 20:35:25
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suifeng91

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
30937747: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-06-08 23:22:28
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-09 13:35:18
30937747: 金币+1, 做出来了。 2012-06-17 08:56:41
30937747: 回帖置顶 2012-06-17 08:56:46
30937747: 金币+1, 感谢交流 2012-06-17 08:57:18
原核的共表达没做过，真核的共表达做过。我的建议：如果共表达载体只检测出一个目的蛋白，不妨换用双载体（比例1:1）共转化试一试？
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人生不是一场物质的盛宴，而是一次灵魂的修炼，使它在谢幕之时比开幕之初更为高尚。
15楼2012-06-08 15:02:26
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30937747

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by suifeng91 at 2012-06-08 15:02:26
原核的共表达没做过，真核的共表达做过。我的建议：如果共表达载体只检测出一个目的蛋白，不妨换用双载体（比例1:1）共转化试一试？

我也想过，做原核请问有什么双载体
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我依旧会努力.
16楼2012-06-08 23:22:22
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30937747

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by susizheng at 2012-06-07 20:35:25
这种情况一般没遇到过，单独表达没问题，共表达一般都没啥问题。...

可是被我遇到了诶。。
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我依旧会努力.
17楼2012-06-08 23:23:08
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danlv

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by susizheng at 2012-06-07 20:35:25
这种情况一般没遇到过，单独表达没问题，共表达一般都没啥问题。...

请问共表达的时候，前面一个基因用终止密码子终止翻译后，后面加上RBS和后面一个基因时，前后两个基因的阅读框有要求吗？阅读框一致起来更好还是错开更好？谢谢
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18楼2012-08-26 13:35:41
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
请问这个问题最后怎么解决的？有什么经验介绍下
我也正在做类似的工作，现在还没构建好载体
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19楼2013-10-24 22:02:23
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ddtao

新虫 (小有名气)
建议用Polycysteine-dendritic poly(His,Arg)1:5试一试
http://www.novel-polylysine.com/main/home/htm.php?nowmenuid=2
huiyisu@126.com
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20楼2016-04-02 12:49:41
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