24小时热门版块排行榜

返回列表

30937747

木虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1257.9
散金: 380
帖子: 261
在线: 86.9小时
虫号: 1037346
注册: 2010-06-07
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 共表达载体只表达出一个蛋白

我用的是pETDuet-1共表达载体，移码突变的问题已经考虑过了，导师也看过应该不存在问题。我按顺序连了A、B两个基因上去，A和B基因的最后都带了终止密码子。电转至BL21后在30℃和37℃进行诱导表达（4h），但都是只表达了B这个蛋白，请问是什么原因?

回复此楼

» 猜你喜欢

ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有176人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

同时表达两种蛋白表达问题已经有3人回复
两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗? 已经有7人回复
用过pET28a(+)表达载体的高人请指教已经有31人回复
【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂已经有12人回复
毕赤酵母表达出蛋白但没有活性已经有18人回复
pMD19与pUC19是否可以作为表达载体已经有8人回复
表达载体构建的相关问题已经有15人回复
【求助/交流】用毕赤酵母表达载体pPIC9K表达蛋白时分子量的估计？已经有4人回复
【求助/交流】大肠杆菌表达的目的蛋白没活性，可以考虑换什么表达载体？已经有7人回复
【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带已经有41人回复
【求助/交流】蛋白酶去信号肽可以正常表达吗？和表达载体有关吗？已经有3人回复
【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株已经有6人回复

我依旧会努力.

1楼 2012-06-01 17:10:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖甜到憂傷

MolEPI: 10
应助: 130 (高中生)
贵宾: 0.008
金币: 4713.3
散金: 2273
红花: 56
帖子: 2319
在线: 743.3小时
虫号: 642666
注册: 2008-11-01
性别: GG
专业: 有机合成

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-05 14:10:40
30937747: 金币+3, ★有帮助, 3ks 2012-06-05 20:05:17
30937747: 金币+1, 做出来了。 2012-06-17 08:55:51
30937747: 金币+1, 感谢交流 2012-06-17 08:57:26

pETDuet-1有两个单独的t7-MCS，两个基因前面是否都有t7。
如果两个基因都有t7,建议先将A单独表达看看，有可能A基因不适合在大肠中表达。