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寒心季

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR跑出2条带怎么回事? 已有5人参与

PCR产物回收后连接至T载体,转化DH5α,菌落PCR后出现两条带,目的片段是500多bp,底下又出了一条,没测序选了1个克隆摇菌提取质粒继续酶切,酶切胶图正常,回收后再连接至TRV2载体,转化DH5α,菌落PCR后又出现2条带,这是怎么回事,退火是58度,12.5的体系。第一个引物是M13+/-N,第二个引物是TRV2 F/R。

菌落PCR跑出2条带怎么回事?
连接至T载体


菌落PCR跑出2条带怎么回事?-1
连接至TRV2载体
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
下面的是引物二聚体的带

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
2楼2015-05-05 22:37:43
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匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
7楼2015-05-10 05:03:17
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听风#我

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般来说,退火温度高跑不出带,退火温度低跑出多条带,你可以调高一点温度
8楼2015-05-14 20:36:54
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胖小儿

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

遇到同样的问题,也是连接TRV后扩增目的基因有两条带,求大神解答。
9楼2015-05-18 23:32:04
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普通回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-06 09:55:14
小于100bp的基本可以判断是引物二聚体,你的marker没标,你自己对着marker判断,但是第一张图有三个条带,中间那条应该不是markar,使用特异性高的Taq酶扩增试试

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-05-06 09:04:26
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

中间那条应该不是以内二聚体,说错了,刚刚走神了。。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-05-06 09:05:26
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寒心季

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-05-06 09:04:26
小于100bp的基本可以判断是引物二聚体,你的marker没标,你自己对着marker判断,但是第一张图有三个条带,中间那条应该不是markar,使用特异性高的Taq酶扩增试试...

谢谢啊,最左边那条是DL2000,我是用的rTaq  Mix做的
5楼2015-05-06 09:16:42
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zhang6871

银虫 (正式写手)

引物二聚体,或者是引物非特异。
过于功利,浮躁,布满灰尘的心都是创新的杀手!多记,心静,多动手,贴近大自然!
6楼2015-05-06 11:05:01
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

质粒上上肥特异性扩增吧,不放心就测序看看。
10楼2015-05-19 08:58:29
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