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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR跑出2条带怎么回事？
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寒心季

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR跑出2条带怎么回事？ 已有5人参与

PCR产物回收后连接至T载体，转化DH5α，菌落PCR后出现两条带，目的片段是500多bp，底下又出了一条，没测序选了1个克隆摇菌提取质粒继续酶切，酶切胶图正常，回收后再连接至TRV2载体，转化DH5α，菌落PCR后又出现2条带，这是怎么回事，退火是58度，12.5的体系。第一个引物是M13+/-N，第二个引物是TRV2 F/R。

菌落PCR跑出2条带怎么回事？
连接至T载体


菌落PCR跑出2条带怎么回事？-1
连接至TRV2载体
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1楼 2015-05-05 21:21:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面的是引物二聚体的带

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
2楼2015-05-05 22:37:43
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匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
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7楼2015-05-10 05:03:17
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听风#我

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般来说，退火温度高跑不出带，退火温度低跑出多条带，你可以调高一点温度
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8楼2015-05-14 20:36:54
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胖小儿

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

遇到同样的问题，也是连接ＴＲＶ后扩增目的基因有两条带，求大神解答。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-05-18 23:32:04
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普通回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-06 09:55:14
小于100bp的基本可以判断是引物二聚体，你的marker没标，你自己对着marker判断，但是第一张图有三个条带，中间那条应该不是markar，使用特异性高的Taq酶扩增试试
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

寒心季
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-05-06 09:04:26
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
中间那条应该不是以内二聚体，说错了，刚刚走神了。。。
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-05-06 09:05:26
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寒心季

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-05-06 09:04:26
小于100bp的基本可以判断是引物二聚体，你的marker没标，你自己对着marker判断，但是第一张图有三个条带，中间那条应该不是markar，使用特异性高的Taq酶扩增试试...

谢谢啊，最左边那条是DL2000，我是用的rTaq  Mix做的
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5楼2015-05-06 09:16:42
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zhang6871

银虫 (正式写手)
引物二聚体，或者是引物非特异。
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
6楼2015-05-06 11:05:01
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
质粒上上肥特异性扩增吧，不放心就测序看看。
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10楼2015-05-19 08:58:29
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