应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR跑出2条带怎么回事？
111/2返回列表12下一页
查看: 9055  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

寒心季

新虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR跑出2条带怎么回事？ 已有5人参与

PCR产物回收后连接至T载体，转化DH5α，菌落PCR后出现两条带，目的片段是500多bp，底下又出了一条，没测序选了1个克隆摇菌提取质粒继续酶切，酶切胶图正常，回收后再连接至TRV2载体，转化DH5α，菌落PCR后又出现2条带，这是怎么回事，退火是58度，12.5的体系。第一个引物是M13+/-N，第二个引物是TRV2 F/R。

菌落PCR跑出2条带怎么回事？
连接至T载体


菌落PCR跑出2条带怎么回事？-1
连接至TRV2载体
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-05 21:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面的是引物二聚体的带

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
天道酬勤
2楼2015-05-05 22:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
7楼2015-05-10 05:03:17
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

听风#我

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般来说，退火温度高跑不出带，退火温度低跑出多条带，你可以调高一点温度
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2015-05-14 20:36:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胖小儿

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

遇到同样的问题，也是连接ＴＲＶ后扩增目的基因有两条带，求大神解答。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-05-18 23:32:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-06 09:55:14
小于100bp的基本可以判断是引物二聚体，你的marker没标，你自己对着marker判断，但是第一张图有三个条带，中间那条应该不是markar，使用特异性高的Taq酶扩增试试
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

寒心季
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-05-06 09:04:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
中间那条应该不是以内二聚体，说错了，刚刚走神了。。。
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-05-06 09:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寒心季

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-05-06 09:04:26
小于100bp的基本可以判断是引物二聚体，你的marker没标，你自己对着marker判断，但是第一张图有三个条带，中间那条应该不是markar，使用特异性高的Taq酶扩增试试...

谢谢啊，最左边那条是DL2000，我是用的rTaq  Mix做的
赞一下 回复此楼
5楼2015-05-06 09:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang6871

银虫 (正式写手)
引物二聚体，或者是引物非特异。
赞一下 回复此楼
过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
6楼2015-05-06 11:05:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)
质粒上上肥特异性扩增吧，不放心就测序看看。
赞一下 回复此楼
10楼2015-05-19 08:58:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 寒心季 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-29 18:15 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:51 by jCd0dEvKHShX
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 11:49 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:29 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭