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[交流]
PCR为什么需要2条引物？
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为什么需要两条才有特定片段出来？ 不要告诉我一条会怎么样，我想知道为什么两条会这样。 |
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 Molecular Biology |
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gyesang
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看天: 金币+5, 谢谢回答，我的问题是为什么两条引物就只能把他们之间序列P出来？ 2012-12-07 22:50:09
amisking: 回帖置顶 2012-12-08 18:55:23
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看天: 金币+5, 谢谢回答，我的问题是为什么两条引物就只能把他们之间序列P出来？ 2012-12-07 22:50:09
amisking: 回帖置顶 2012-12-08 18:55:23
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两条引物是指数扩增，即PCR合成的新链可以作为下一轮PCR的模板，假设你其实模板DNA的量为a, 你PCR循环为x，那么X个循环结束后，你的目标DNA的量为 a * 2^x(这里假设扩增效率是2) 一条引物是线性扩增，模板始终是你加入的DNA模板，而且产物都是单链的，如果还是上述条件，X个循环结束后，你的目标DNA的量为 x*a，且为单链，扩增后的得到的DNA量天壤之别 两条引物扩增和单引物扩增在实际中都有应用 当你做克隆时，你需要双引物扩增，一因为你需要足够量的DNA，二单链的DNA，你克隆不上载体 当在做测序是，就要当引物扩增了 |
4楼2012-12-07 22:45:07
gyesang
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11楼2012-12-08 00:46:44
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看天: 金币+5, 谢谢 2012-12-08 11:34:53
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分子生物学书中的任何一本均可以回答这个问题。 我想楼主的困惑是为什么使用两条引物的时候扩增产物就会在上游——下游引物之间，而不是出了他们的范围…… 在学习DNA相关知识时，有个单链结合蛋白，不知道楼主是否还有印象？ 由于单链会自发发生降解，酸性环境中速率更快一些，当然双链也会，但是比单链慢多了；这里没有考虑可以降解DNA的各种酶的因素。 之所以最后出来的是上下游之间的序列，就是由于此范围内的DNA互补结合成了双链而稳定存在； 即使是扩增超出了上下游的范围，也会因为是单链，在PCR反应体系中没有单链结合蛋白的存在而自发降解。而范围内的双链会比较稳定地留下来。 [ Last edited by cory0931 on 2012-12-8 at 07:50 ] |
13楼2012-12-08 07:41:11
12楼2012-12-08 06:09:04
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看天: 金币+5, 感谢 2012-12-08 11:35:24
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发一个PCR原理的视频，希望对你有帮助 http://v.youku.com/v_show/id_XMTE1MzQwODA4.html |
15楼2012-12-08 11:08:30
3楼2012-12-07 22:40:33
5楼2012-12-07 22:50:33
6楼2012-12-07 23:12:29
gyesang
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看天: 金币+5, 为什么一条链复制到另一个引物结合的区域就停止复制了呢 2012-12-07 23:32:08
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看天: 金币+5, 为什么一条链复制到另一个引物结合的区域就停止复制了呢 2012-12-07 23:32:08
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这个问题问的。。。。。 DNA是有两条反向互补的链组成，PCR时退火后，引物与模板结合，然后由5‘向3’方向合成，新合成的两条链经过退火后就形成新的DNA双链分子。 去看PCR原理吧。。。一言两语解释不清楚，去看看Kary Mullis当年发明PCR的故事，对于你就容易理解了哈 这个百度文库文章可能对你有用： http://wenku.baidu.com/view/08e02603cc17552707220820.html 楼主可以去试想，这两条引物是设计在两条链上的，如果设计在一条链上，PCR还能成功吗？ |
7楼2012-12-07 23:14:53
8楼2012-12-07 23:32:43
gyesang
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22楼2015-08-28 11:02:31
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