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PCR为什么需要2条引物?
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为什么需要两条才有特定片段出来? 不要告诉我一条会怎么样,我想知道为什么两条会这样。 |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+5, 谢谢 2012-12-08 11:34:53
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+5, 谢谢 2012-12-08 11:34:53
分子生物学书中的任何一本均可以回答这个问题。![]() 我想楼主的困惑是为什么使用两条引物的时候扩增产物就会在上游——下游引物之间,而不是出了他们的范围…… 在学习DNA相关知识时,有个单链结合蛋白,不知道楼主是否还有印象? 由于单链会自发发生降解,酸性环境中速率更快一些,当然双链也会,但是比单链慢多了;这里没有考虑可以降解DNA的各种酶的因素。 之所以最后出来的是上下游之间的序列,就是由于此范围内的DNA互补结合成了双链而稳定存在; 即使是扩增超出了上下游的范围,也会因为是单链,在PCR反应体系中没有单链结合蛋白的存在而自发降解。而范围内的双链会比较稳定地留下来。 [ Last edited by cory0931 on 2012-12-8 at 07:50 ] |
13楼2012-12-08 07:41:11
3楼2012-12-07 22:40:33
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+5, 谢谢回答,我的问题是为什么两条引物就只能把他们之间序列P出来? 2012-12-07 22:50:09
amisking: 回帖置顶 2012-12-08 18:55:23
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+5, 谢谢回答,我的问题是为什么两条引物就只能把他们之间序列P出来? 2012-12-07 22:50:09
amisking: 回帖置顶 2012-12-08 18:55:23
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两条引物是指数扩增,即PCR合成的新链可以作为下一轮PCR的模板,假设你其实模板DNA的量为a, 你PCR循环为x,那么X个循环结束后,你的目标DNA的量为 a * 2^x(这里假设扩增效率是2) 一条引物是线性扩增,模板始终是你加入的DNA模板,而且产物都是单链的,如果还是上述条件,X个循环结束后,你的目标DNA的量为 x*a,且为单链,扩增后的得到的DNA量天壤之别 两条引物扩增和单引物扩增在实际中都有应用 当你做克隆时,你需要双引物扩增,一因为你需要足够量的DNA,二单链的DNA,你克隆不上载体 当在做测序是,就要当引物扩增了 |
4楼2012-12-07 22:45:07
5楼2012-12-07 22:50:33












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