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看天

木虫 (知名作家)

[交流] PCR为什么需要2条引物？

为什么需要两条才有特定片段出来？
不要告诉我一条会怎么样，我想知道为什么两条会这样。
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1楼 2012-12-07 22:03:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+5, 谢谢回答，我的问题是为什么两条引物就只能把他们之间序列P出来？ 2012-12-07 22:50:09
amisking: 回帖置顶 2012-12-08 18:55:23
两条引物是指数扩增，即PCR合成的新链可以作为下一轮PCR的模板，假设你其实模板DNA的量为a, 你PCR循环为x，那么X个循环结束后，你的目标DNA的量为 a * 2^x(这里假设扩增效率是2)

一条引物是线性扩增，模板始终是你加入的DNA模板，而且产物都是单链的，如果还是上述条件，X个循环结束后，你的目标DNA的量为 x*a，且为单链，扩增后的得到的DNA量天壤之别

两条引物扩增和单引物扩增在实际中都有应用
当你做克隆时，你需要双引物扩增，一因为你需要足够量的DNA，二单链的DNA，你克隆不上载体
当在做测序是，就要当引物扩增了
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4楼2012-12-07 22:45:07
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cory0931

至尊木虫 (文坛精英)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+5, 谢谢 2012-12-08 11:34:53
分子生物学书中的任何一本均可以回答这个问题。

我想楼主的困惑是为什么使用两条引物的时候扩增产物就会在上游——下游引物之间，而不是出了他们的范围……
在学习DNA相关知识时，有个单链结合蛋白，不知道楼主是否还有印象？
由于单链会自发发生降解，酸性环境中速率更快一些，当然双链也会，但是比单链慢多了；这里没有考虑可以降解DNA的各种酶的因素。
之所以最后出来的是上下游之间的序列，就是由于此范围内的DNA互补结合成了双链而稳定存在；
即使是扩增超出了上下游的范围，也会因为是单链，在PCR反应体系中没有单链结合蛋白的存在而自发降解。而范围内的双链会比较稳定地留下来。

[ Last edited by cory0931 on 2012-12-8 at 07:50 ]
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13楼2012-12-08 07:41:11
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 回帖置顶 2012-12-08 11:36:22
引用回帖:
10楼: Originally posted by 看天 at 2012-12-08 00:10:42
要是第一次过头了 第二次不也是过头了吗 以后不都是过头了吗...

你可以自己比划一下啊
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11楼2012-12-08 00:46:44
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
各位对这个小朋友提问解释得挺耐心啊！
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12楼2012-12-08 06:09:04
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马踏飞燕1238

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+5, 感谢 2012-12-08 11:35:24
发一个PCR原理的视频，希望对你有帮助
http://v.youku.com/v_show/id_XMTE1MzQwODA4.html
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15楼2012-12-08 11:08:30
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酶切专家

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
学习一下PCR的基本原理就明白了
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3楼2012-12-07 22:40:33
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看天

木虫 (知名作家)
我的问题是为什么两条引物就只能把他们之间序列P出来
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5楼2012-12-07 22:50:33
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严春秋

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么需要两条才有特定片段出来？
不要告诉我一条会怎么样，我想知道为什么两条会这样。
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6楼2012-12-07 23:12:29
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看天: 金币+5, 为什么一条链复制到另一个引物结合的区域就停止复制了呢 2012-12-07 23:32:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by 看天 at 2012-12-07 22:50:33
我的问题是为什么两条引物就只能把他们之间序列P出来

这个问题问的。。。。。
DNA是有两条反向互补的链组成，PCR时退火后，引物与模板结合，然后由5‘向3’方向合成，新合成的两条链经过退火后就形成新的DNA双链分子。

去看PCR原理吧。。。一言两语解释不清楚，去看看Kary Mullis当年发明PCR的故事，对于你就容易理解了哈

这个百度文库文章可能对你有用：
http://wenku.baidu.com/view/08e02603cc17552707220820.html

楼主可以去试想，这两条引物是设计在两条链上的，如果设计在一条链上，PCR还能成功吗？
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7楼2012-12-07 23:14:53
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-07 23:14:53
这个问题问的。。。。。
DNA是有两条反向互补的链组成，PCR时退火后，引物与模板结合，然后由5‘向3’方向合成，新合成的两条链经过退火后就形成新的DNA双链分子。

去看PCR原理吧。。。一言两语解释不清楚，去 ...

为什么一条链复制到另一个引物结合的位置就停止复制了呢，他们不再一条链上啊
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8楼2012-12-07 23:32:43
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 看天 at 2012-12-07 23:32:43
为什么一条链复制到另一个引物结合的位置就停止复制了呢，他们不再一条链上啊...

以你加进去的DNA为模板，的确存在复制过头的事，但以新合成的链为模板就不会，你可以在纸上笔画一下，随着PCR循环的进行，新合成的链在量上肯定会占绝对性优势，以模板合成的DNA仅占 a*x
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9楼2012-12-07 23:48:14
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看天

木虫 (知名作家)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-07 23:48:14
以你加进去的DNA为模板，的确存在复制过头的事，但以新合成的链为模板就不会，你可以在纸上笔画一下，随着PCR循环的进行，新合成的链在量上肯定会占绝对性优势，以模板合成的DNA仅占 a*x...

要是第一次过头了 第二次不也是过头了吗 以后不都是过头了吗
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10楼2012-12-08 00:10:42
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伤何处

木虫 (正式写手)
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看天: 金币+5, 明白了 2012-12-08 11:35:09
建议LZ自己把PCR扩增的过程画一下，从一条DNA链，加引物后，变成两条，再一直到八条，你就会发现了。。为什么能扩增出特定区段的
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14楼2012-12-08 11:02:46
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
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看天: 金币+1, 不是 2012-12-08 11:35:39
因为你的目的是为了得到2条链！一条引物只能与模板双链的一条配对

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2012-12-08 11:13:48
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gdj363702043

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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看天: 金币+3 2012-12-10 12:11:17
这种SB问题也问？  回去在看看课本   完全外行
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17楼2012-12-08 16:45:01
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oranzxc

金虫 (初入文坛)
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看天: 金币+3 2012-12-10 12:11:56
可以说两点确定一条直线吗
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18楼2012-12-10 10:35:07
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孙启亮

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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看天: 金币+5 2012-12-10 12:11:04
用上下游引物扩增后，会形成互补的双链，这样在DNA聚合酶的作用下互补双链被切下来，那些多余的成分没有互补的就不是你需要的了，所以你得到的是特定片段的大小
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19楼2012-12-10 11:35:22
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wardwaads

银虫 (小有名气)
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看天: 金币+3 2013-10-22 23:57:58
不知道你是否已经解决，推荐给你一篇文献，我当初也是想不通这个，后来看了文献就懂了。
Specific Enzymatic Amplification of DNA In Vitro: The Polymerase Chain Reaction.
author: K. Mullis
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20楼2013-10-20 22:45:13
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taccycle

铜虫 (小有名气)
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看天: 金币+2 2013-10-22 23:57:55
引用回帖:
8楼: Originally posted by 看天 at 2012-12-07 23:32:43
为什么一条链复制到另一个引物结合的位置就停止复制了呢，他们不再一条链上啊...

仔细看看gyesang回复的那个图，仔细看看就明白了
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21楼2013-10-21 09:33:19
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河畔佳人

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
22楼2015-08-28 11:02:31
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woshilaoaa2楼
2012-12-07 22:23   回复  
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