| 查看: 2570 | 回复: 11 | |||
ggyy0911铁虫 (正式写手)
|
[交流]
测序正确的片段双酶切连接表达载体，提质粒PCR验证后，还需要再次测序吗？
|
|
我做的是表达，照理应该测序确定一下，不过之前对双酶切太信任了，我切胶回收又从来不用紫外，都是肉眼看着徒手切。感觉没有什么能让片段变化的因素。 但是最近单酶切的一个样品送去测序，连的片段已经测序正确了，pcr鉴定用的是上游特异性引物，下游通用引物，pcr条带大小正确，但是测序居然连反了……而且末端有三个单点突变……突变可能是测序错误，我一看反了也没有再细看。但是连反了是什么鬼！ 我还有六个样品，是双酶切连接的，在克隆载体上测序正确，然后连了表达载体，提质粒pcr鉴定，上下游引物分别是特异性引物和通用引物，条带大小正常，而且每个样挑的三个单克隆条带大小相同。这是不是意味着这三个样我可以随便用呢？网上没有关于这个的讨论，我心里挺没底的，做过的同学都来说一说吧。 |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有208人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 连接克隆载体提取质粒结果跑出两条带
已经有11人回复
- 菌落PCR明显有目标条带，酶切验证却不对，测序也没结果
已经有6人回复
- 质粒，PCR产物双酶切后胶回收不回来？求大神指导！
已经有49人回复
- PCR片段连接载体，转化不出阳性克隆，求解?
已经有14人回复
- 片段连接到载体后，总在酶切位点处发生缺失
已经有5人回复
- 单酶切失败。质粒验证显示正确，但是PCR验证与酶切验证出现很多问题，麻烦大家解决下
已经有4人回复
- 关于测序的问题-双酶切和PCR验证均是对的 但是测序后有重叠现象
已经有8人回复
- pMD19-T双酶切，目的片段上酶切位点和载体上一样
已经有7人回复
- 关于pET32a载体构建后，双酶切鉴定不正确~求助
已经有10人回复
- 关于构载体过程中PCR验证正确但是测序为空载体的困惑
已经有7人回复
- pMD18-T载体连接了目的片段后双酶切鉴定出现了好多条带 怎么回事?
已经有6人回复
- 载体酶切位点与目的片段重复
已经有13人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异
已经有16人回复
- 关于T载体连接验证后测序不对
已经有3人回复
- 基因与载体连接转化后涂版长出了菌，提质粒却没有提出来，不知道什么原因？？
已经有17人回复
- 目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带
已经有10人回复
- 菌落PCR多条带，还能往后做双酶切吗
已经有25人回复
- 我构建质粒后酶切验证的问题
已经有13人回复
- 连接产物双酶切
已经有11人回复
- 原核表达载体构建，测序不成功
已经有20人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 用于表达的重组载体构建后需要测序吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】双酶切PCR产物的时间
已经有7人回复
我欲乘风归去
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3280.1
- 散金: 1055
- 红花: 26
- 帖子: 841
- 在线: 878.8小时
- 虫号: 3340869
- 注册: 2014-07-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
2楼2015-04-07 12:16:22
ggyy0911
铁虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1093.6
- 散金: 16
- 红花: 8
- 帖子: 510
- 在线: 148.2小时
- 虫号: 1888956
- 注册: 2012-07-11
- 性别: MM
- 专业: 临床兽医学
3楼2015-04-07 16:04:42
流氓一个
金虫 (正式写手)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 1394.3
- 散金: 91
- 红花: 4
- 帖子: 304
- 在线: 90.3小时
- 虫号: 2471867
- 注册: 2013-05-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2015-04-08 08:33:32
xiaochong8693
木虫之王 (文坛精英)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 74356.8
- 散金: 3788
- 红花: 233
- 帖子: 47069
- 在线: 2659.7小时
- 虫号: 752823
- 注册: 2009-04-20
- 专业: 动物学
5楼2015-04-08 09:16:19
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
ggyy0911: 金币+5 2015-04-08 22:10:25
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
ggyy0911: 金币+5 2015-04-08 22:10:25
|
本帖内容被屏蔽 |
6楼2015-04-08 09:51:12
Sunshine092
木虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 2882.9
- 红花: 1
- 帖子: 110
- 在线: 187.6小时
- 虫号: 3015492
- 注册: 2014-03-04
- 专业: 细胞信号转导
7楼2015-04-08 10:35:39
ggyy0911
铁虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1093.6
- 散金: 16
- 红花: 8
- 帖子: 510
- 在线: 148.2小时
- 虫号: 1888956
- 注册: 2012-07-11
- 性别: MM
- 专业: 临床兽医学
8楼2015-04-08 22:13:08
ggyy0911
铁虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1093.6
- 散金: 16
- 红花: 8
- 帖子: 510
- 在线: 148.2小时
- 虫号: 1888956
- 注册: 2012-07-11
- 性别: MM
- 专业: 临床兽医学
9楼2015-04-08 22:14:54
Sunshine092
木虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 2882.9
- 红花: 1
- 帖子: 110
- 在线: 187.6小时
- 虫号: 3015492
- 注册: 2014-03-04
- 专业: 细胞信号转导
10楼2015-04-09 11:36:50
20