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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 用于表达的重组载体构建后需要测序吗?已有4人参与

做蛋白的体外表达,构建完重组质粒之后需要测序确定重组质粒构建是否正确吗?还是就双酶切和PCR验证就可以啊?个人觉得测序要保险一点,但是看别人好像都不测序的说。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-05 20:04:06
可以不测序,因为你在TA克隆的时候已经测序验证过了,再连上表达载体的时候只要验证有你的外源片段就行了。如果你担心在连接表达载体的时候出错,那你就最好再测序一次吧。你的这个帖我也回了,你考虑一下我的建议。http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3369012&pid=1971104&page=1#pid1971104
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-05 19:47:28
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-05 19:47:28:
可以不测序,因为你在TA克隆的时候已经测序验证过了,再连上表达载体的时候只要验证有你的外源片段就行了。如果你担心在连接表达载体的时候出错,那你就最好再测序一次吧。你的这个帖我也回了,你考虑一下我的建议 ...

谢谢您的指点啊!真是受益匪浅呢!
3楼2011-07-05 19:57:53
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gwbk

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-06 07:41:15
去测一下吧,我郁闷就在这呢。TA克隆完全正确,双酶切换载体后竟然有点突变不说,还有2个连续的碱基缺失突变。难以承受的打击!
4楼2011-07-05 21:22:47
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friya0910

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-07-05 21:22:47:
去测一下吧,我郁闷就在这呢。TA克隆完全正确,双酶切换载体后竟然有点突变不说,还有2个连续的碱基缺失突变。难以承受的打击!

恩,保险起见还是测一下吧!
5楼2011-07-05 21:25:03
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ck8148

金虫 (初入文坛)

★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 欢迎交流您的观点 2011-07-22 17:10:45
没有必要测序,绝大部分情况下酶切验证是最可靠的,只要切下的条带大小与目的条带一样即可,没有太大的测序必要。并且不是所有的载体都能够测序的,相对麻烦些。
6楼2011-07-22 16:38:32
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★
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西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-23 16:57:44
从概率上将,如果你的片段序列内没有特殊区域,比如高GC或者重复序列,一般从克隆载体切下来连到表达载体是没什么问题的;但生物实验这种东西尤其是分子实验,肉眼没法直接判断,就怕凡事都有万一,测个序吧,花钱买个放心
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7楼2011-07-22 20:45:22
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