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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用于表达的重组载体构建后需要测序吗？
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friya0910

新虫 (正式写手)

[交流] 用于表达的重组载体构建后需要测序吗？ 已有4人参与

做蛋白的体外表达，构建完重组质粒之后需要测序确定重组质粒构建是否正确吗？还是就双酶切和ＰＣＲ验证就可以啊？个人觉得测序要保险一点，但是看别人好像都不测序的说。
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1楼 2011-07-05 19:25:29
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-05 20:04:06
可以不测序，因为你在TA克隆的时候已经测序验证过了，再连上表达载体的时候只要验证有你的外源片段就行了。如果你担心在连接表达载体的时候出错，那你就最好再测序一次吧。你的这个帖我也回了，你考虑一下我的建议。http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3369012&pid=1971104&page=1#pid1971104
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-05 19:47:28
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-05 19:47:28:
可以不测序，因为你在TA克隆的时候已经测序验证过了，再连上表达载体的时候只要验证有你的外源片段就行了。如果你担心在连接表达载体的时候出错，那你就最好再测序一次吧。你的这个帖我也回了，你考虑一下我的建议 ...

谢谢您的指点啊！真是受益匪浅呢！
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3楼2011-07-05 19:57:53
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gwbk

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-07-06 07:41:15
去测一下吧，我郁闷就在这呢。TA克隆完全正确，双酶切换载体后竟然有点突变不说，还有2个连续的碱基缺失突变。难以承受的打击！
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4楼2011-07-05 21:22:47
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friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-07-05 21:22:47:
去测一下吧，我郁闷就在这呢。TA克隆完全正确，双酶切换载体后竟然有点突变不说，还有2个连续的碱基缺失突变。难以承受的打击！

恩，保险起见还是测一下吧！
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5楼2011-07-05 21:25:03
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ck8148

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 欢迎交流您的观点 2011-07-22 17:10:45
没有必要测序，绝大部分情况下酶切验证是最可靠的，只要切下的条带大小与目的条带一样即可，没有太大的测序必要。并且不是所有的载体都能够测序的，相对麻烦些。
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6楼2011-07-22 16:38:32
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
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西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-07-23 16:57:44
从概率上将，如果你的片段序列内没有特殊区域，比如高GC或者重复序列，一般从克隆载体切下来连到表达载体是没什么问题的；但生物实验这种东西尤其是分子实验，肉眼没法直接判断，就怕凡事都有万一，测个序吧，花钱买个放心
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2011-07-22 20:45:22
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