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策马入林

新虫 (小有名气)

[交流] 关于T载体连接验证后测序不对 已有2人参与

小弟做T载体连接,一共分两批做了八个基因,前面五个基因提取质粒跑图验证并进行pcr验证后送去测序,结果都ok;可是后面这一批送去测序测序结果都是T载体里插入了一段乱七八糟的序列,不是目的基因,其中有两个基因菌液pcr也ok,但是测序得到的结果在ncbi上blast结果是E.COLI部分基因组序列;以前做原核表达载体的时候也遇到过这种情况,十分困惑,请求各位帮忙解惑
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senix

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是你PCR引物有问题吧!
做实验就是和上帝玩游戏!
2楼2013-04-27 20:00:06
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策马入林

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by senix at 2013-04-27 20:00:06
可能是你PCR引物有问题吧!

引物有问题?可以详细说说吗
3楼2013-04-28 12:22:05
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
个人觉得你接入T载体上的是大肠杆菌的基因组片段……T载体中测序不至于出错的……
4楼2013-04-28 17:46:49
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