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[交流] 关于T载体连接验证后测序不对已有2人参与

小弟做T载体连接，一共分两批做了八个基因，前面五个基因提取质粒跑图验证并进行pcr验证后送去测序，结果都ok；可是后面这一批送去测序测序结果都是T载体里插入了一段乱七八糟的序列，不是目的基因，其中有两个基因菌液pcr也ok，但是测序得到的结果在ncbi上blast结果是E.COLI部分基因组序列；以前做原核表达载体的时候也遇到过这种情况，十分困惑，请求各位帮忙解惑

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1楼2013-04-27 17:01:16

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senix

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可能是你PCR引物有问题吧！

做实验就是和上帝玩游戏！

2楼2013-04-27 20:00:06

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引用回帖:

2楼: Originally posted by senix at 2013-04-27 20:00:06
可能是你PCR引物有问题吧！

引物有问题？可以详细说说吗

3楼2013-04-28 12:22:05

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yujitianqing

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

个人觉得你接入T载体上的是大肠杆菌的基因组片段……T载体中测序不至于出错的……

4楼2013-04-28 17:46:49

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