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关于pET32a载体构建后，双酶切鉴定不正确~求助
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情况是这样，我有一个1100的目标片段，准备连入pET32a质粒（5900），设计引物时已连上了酶切位点。 而后我PCR得到目的片段，回收，连T载体，测序，正确（包括酶切位点） 而后我双酶切T载体，及pET32啊，回收T载体上1100的片段已经5900的pET32a T4连接过夜，转化凃板，挑单菌落。这时我用特异引物进行菌液PCR,能P出目的条带； 为了进一步坚定，我提了质粒进行双酶切，这时问题来了，切出的条带居然是1100和3000左右的条带 这是怎么回事呢，我用pET32a的序列查了下确实没同样的酶切位点会把载体切断，那怎个3000是怎么出来的呢？ 而且连涂了好几个板，出的都是这一摸一样的结果，蛋疼啊，求帮助~~~谢谢 |
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