应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 片段连接到载体后，总在酶切位点处发生缺失
61/1返回列表
查看: 2894  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liangte0705

金虫 (小有名气)

[求助] 片段连接到载体后，总在酶切位点处发生缺失 已有3人参与

各位同学，我最近遇到了一个难题。我的一个2900bp大小的片段，通过XhoⅠ和EcoRⅠ两个酶切位点酶切后，连到POK-12载体上，通过pcr鉴定，片段连入了，但酶切鉴定失败，测序后发现从XhoⅠ开始缺失300多bp碱基。我怀疑是片段和宿主菌发生了重组，因此换了许多感受态，例如DH5α，JM109，HB101,但仍然出现上述问题。已经一个多月了，仍然没有解决，请各位同学帮帮忙，看看是不是有什么方法能够解决，多谢大家了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-05-09 10:22:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutonglu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liangte0705: 金币+1, ★有帮助 2014-05-09 21:05:04
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-09 22:47:42
有可能是在你300多bp这个位置有另一个XhoI的酶切位点或者产生了星活性（如果有星活性要减少酶切时间）。所以酶切后跑胶回收要和未切的原始片段一起跑，每一步都确认了就知道原因了。
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-09 20:19:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liangte0705: 金币+1, ★有帮助 2014-05-10 13:50:48
重组的可能性不大，很可能是被切断了，你有分析基因内部酶切位点吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-10 07:30:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
liangte0705: 金币+1 2014-05-10 13:51:18
建议片段先ta克隆后，测序对了再切下来

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-10 07:31:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liangte0705: 金币+1 2014-05-10 13:51:11
那你PCR鉴定时大小就不正确吧？
XhoI酶切位点完整吗？
不同的情况应该具体分析。
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-10 10:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liangte0705

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-10 07:30:30
重组的可能性不大，很可能是被切断了，你有分析基因内部酶切位点吗？

切断了，怎么连到载体上的呢
赞一下 回复此楼
6楼2014-05-10 13:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liangte0705 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:38 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:38 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 05:34 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:26 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:21 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭