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连接转化后鉴定大小不对，求帮助！！！
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我用Age I和 EcoR I酶切回收的PCR产物，得到1500bp的目的片段；用Age I 和EcoR I 酶切载体,得到749bp和9.2kb的片段，回收9.2kb的载体。16℃过夜连接，转化后菌落PCR鉴定，阳性条带应该是534bp，可是出来条带的都在2kb。鉴定引物分别是基因上和载体上的，没有序列上的重复。 别人帮我重新做了一整个流程，结果也一样。抽过质粒，测序结果是空载体。 这方面经验不足，真心求帮助！谢谢。 |
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