应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接转化后鉴定大小不对，求帮助！！！
51/1返回列表
查看: 1158  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

落枫林

无虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化后鉴定大小不对，求帮助！！！

我用Age I和 EcoR I酶切回收的PCR产物，得到1500bp的目的片段；用Age I 和EcoR I 酶切载体,得到749bp和9.2kb的片段，回收9.2kb的载体。16℃过夜连接，转化后菌落PCR鉴定，阳性条带应该是534bp，可是出来条带的都在2kb。鉴定引物分别是基因上和载体上的，没有序列上的重复。
        别人帮我重新做了一整个流程，结果也一样。抽过质粒，测序结果是空载体。
        这方面经验不足，真心求帮助！谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-12 16:05:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peace12039088

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-12 18:04:47
落枫林(金币+5): 2011-08-15 09:18:41
建议对阳性克隆小样法提取质粒后做酶切鉴定。可以依然选用Age I和 EcoR I酶切，看是否可以得到1500bp与9.2kb的片段，也可以依据载体和目标片段的酶切位点选用新的内切酶做但单酶切或双酶切，但必须保证获得片段的条数与大小与预期相符。
还有提取质粒后再做一下PCR看一下，有时候菌落PCR的结果受很多未知因素影响，导致我们对结果难以理解。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-08-12 16:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peace12039088

银虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-12 19:19:05
忘记说了，多挑几个克隆抽质粒看看。你送几个样测序的？不知你转化后的菌落长的怎么样，用点热激还是电转。 我曾经抽提40个质粒酶切检测，才得到一个阳性克隆。还有你的目标片段有点大，如果此次不能得到阳性克隆，建议有电击转化。希望能给你提供点滴信息。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-08-12 16:26:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励下下 2011-08-12 19:19:40
落枫林(金币+2): 2011-08-19 09:45:01
上图吧。。。
考虑非特异性条带。。。
不过你可以提取质粒看看。。。然后再酶切一下。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-08-12 17:28:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

米小爷

新虫 (初入文坛)
楼主  你有PCR和胶回收以及构建重组质粒等的具体操作步骤没？跪求啊
赞一下 回复此楼
5楼2015-01-20 15:40:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 落枫林 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +4 SYA！ 2026-03-23 4/200 2026-03-26 15:27 by caiaijun80
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +5 kongweilin 2026-03-26 7/350 2026-03-26 14:37 by mapenggao
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭