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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于测序的问题-双酶切和PCR验证均是对的 但是测序后有重叠现象
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冰风颤木

金虫 (正式写手)

[求助] 关于测序的问题-双酶切和PCR验证均是对的 但是测序后有重叠现象

1、我送的样品是菌液，1ML新鲜过夜培养的菌液，样品已经通过通用引物PCR和双酶切验证，均是对的；
2、测序的结果是有重叠现象，但是发给我的测序结果序列和我目的序列比对一致的，然后我打电话咨询技术支持，技术支持的回答是：我挑取的不是单克隆，建议重新挑取单克隆送去测序。
3、我使用的目的载体是pACYCDuet-1，是不是这个载体会不会不好测序啊？
请问大家也遇到过该问题吗？谢谢大家！
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船到桥头自然直
1楼 2013-11-22 19:51:43
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰风颤木: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-23 09:39:55
测序从某一段开始出现套峰，可能原因还在于你的样品不是单克隆，可以将你的质粒转化大肠杆菌，然后挑单菌落摇菌抽质粒送测序，可以解决这个问题

套峰不是载体不好测序造成的
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-23 01:23:03
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-23 01:23:03
测序从某一段开始出现套峰，可能原因还在于你的样品不是单克隆，可以将你的质粒转化大肠杆菌，然后挑单菌落摇菌抽质粒送测序，可以解决这个问题

套峰不是载体不好测序造成的

谢谢你的解答 我试试啊
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船到桥头自然直
3楼2013-11-23 09:40:10
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰风颤木: 金币+3 2013-11-24 19:14:16
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-24 21:15:40
非单克隆，PCR和酶切看不出来的
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借你一生好不好
4楼2013-11-23 20:29:16
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-11-23 20:29:16
非单克隆，PCR和酶切看不出来的

PCR可以看出来的啊。。。。。。。。
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船到桥头自然直
5楼2013-11-23 21:00:54
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰风颤木: 金币+5, ★有帮助 2013-11-24 19:12:06
gyesang: 金币+1 2013-11-24 21:15:48
既然有重叠峰，也就是你挑的不是单一菌，可以尝试稀释后涂板，再挑单菌落测序

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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
6楼2013-11-24 09:29:08
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

既然有重叠峰，也就是你挑的不是单一菌，可以尝试稀释后涂板，再挑单菌落测序

[ 发自小木虫客户端 ]
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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
7楼2013-11-24 09:29:19
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冰风颤木 at 2013-11-23 21:00:54
PCR可以看出来的啊。。。。。。。。...

相似长度的PCR产物 看条带是看不出来的
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借你一生好不好
8楼2013-11-24 10:32:52
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuxiangdan at 2013-11-24 09:29:08
既然有重叠峰，也就是你挑的不是单一菌，可以尝试稀释后涂板，再挑单菌落测序

你好 谢谢你的解答
我重新找了下测序公司 帮我分析了下 不是套峰 是模板结合不好 重新测了下 峰图不错
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船到桥头自然直
9楼2013-11-24 19:12:52
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