应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于测序的问题-双酶切和PCR验证均是对的 但是测序后有重叠现象
91/1返回列表
查看: 2055  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

冰风颤木

金虫 (正式写手)

[求助] 关于测序的问题-双酶切和PCR验证均是对的 但是测序后有重叠现象

1、我送的样品是菌液，1ML新鲜过夜培养的菌液，样品已经通过通用引物PCR和双酶切验证，均是对的；
2、测序的结果是有重叠现象，但是发给我的测序结果序列和我目的序列比对一致的，然后我打电话咨询技术支持，技术支持的回答是：我挑取的不是单克隆，建议重新挑取单克隆送去测序。
3、我使用的目的载体是pACYCDuet-1，是不是这个载体会不会不好测序啊？
请问大家也遇到过该问题吗？谢谢大家！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
船到桥头自然直
1楼 2013-11-22 19:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰风颤木: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-23 09:39:55
测序从某一段开始出现套峰，可能原因还在于你的样品不是单克隆，可以将你的质粒转化大肠杆菌，然后挑单菌落摇菌抽质粒送测序，可以解决这个问题

套峰不是载体不好测序造成的
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-11-23 01:23:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-23 01:23:03
测序从某一段开始出现套峰，可能原因还在于你的样品不是单克隆，可以将你的质粒转化大肠杆菌，然后挑单菌落摇菌抽质粒送测序，可以解决这个问题

套峰不是载体不好测序造成的

谢谢你的解答 我试试啊
赞一下 回复此楼
船到桥头自然直
3楼2013-11-23 09:40:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰风颤木: 金币+3 2013-11-24 19:14:16
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-24 21:15:40
非单克隆，PCR和酶切看不出来的
赞一下 回复此楼
借你一生好不好
4楼2013-11-23 20:29:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-11-23 20:29:16
非单克隆，PCR和酶切看不出来的

PCR可以看出来的啊。。。。。。。。
赞一下 回复此楼
船到桥头自然直
5楼2013-11-23 21:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰风颤木: 金币+5, ★有帮助 2013-11-24 19:12:06
gyesang: 金币+1 2013-11-24 21:15:48
既然有重叠峰，也就是你挑的不是单一菌，可以尝试稀释后涂板，再挑单菌落测序

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
成功者永不放弃，放弃者永不成功。
6楼2013-11-24 09:29:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

既然有重叠峰，也就是你挑的不是单一菌，可以尝试稀释后涂板，再挑单菌落测序

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
成功者永不放弃，放弃者永不成功。
7楼2013-11-24 09:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冰风颤木 at 2013-11-23 21:00:54
PCR可以看出来的啊。。。。。。。。...

相似长度的PCR产物 看条带是看不出来的
赞一下 回复此楼
借你一生好不好
8楼2013-11-24 10:32:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰风颤木

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuxiangdan at 2013-11-24 09:29:08
既然有重叠峰，也就是你挑的不是单一菌，可以尝试稀释后涂板，再挑单菌落测序

你好 谢谢你的解答
我重新找了下测序公司 帮我分析了下 不是套峰 是模板结合不好 重新测了下 峰图不错
赞一下 回复此楼
船到桥头自然直
9楼2013-11-24 19:12:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 冰风颤木 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +9 Ymlll 2026-03-18 12/600 2026-03-20 00:01 by 23Postgrad
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 296求调剂 +3 www_q 2026-03-18 6/300 2026-03-19 22:28 by zhq0425
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +3 葵梓卫队 2026-03-18 5/250 2026-03-19 19:35 by 给你你注意休息
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭