版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

冰风颤木

金虫 (正式写手)

应助: 21 (小学生)
金币: 2618
散金: 35
红花: 4
帖子: 612
在线: 174.8小时
虫号: 1424985
注册: 2011-10-01
性别: GG
专业: 微生物药物

[求助] 关于测序的问题-双酶切和PCR验证均是对的但是测序后有重叠现象

1、我送的样品是菌液，1ML新鲜过夜培养的菌液，样品已经通过通用引物PCR和双酶切验证，均是对的；
2、测序的结果是有重叠现象，但是发给我的测序结果序列和我目的序列比对一致的，然后我打电话咨询技术支持，技术支持的回答是：我挑取的不是单克隆，建议重新挑取单克隆送去测序。
3、我使用的目的载体是pACYCDuet-1，是不是这个载体会不会不好测序啊？
请问大家也遇到过该问题吗？谢谢大家！

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

生工测序重叠峰交流已经有8人回复
关于构载体过程中PCR验证正确但是测序为空载体的困惑已经有7人回复
折磨了一个月的测序-重叠峰问题！已经有3人回复
请教不知道质粒信息的情况下，怎样设计引物来进行测序已经有7人回复
质粒测序后发现有重叠现象已经有13人回复
我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的已经有31人回复
PCR后电泳是特异性条带，但测序总是出现结合问题。怎么办？已经有9人回复
PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致，是何原因？该如何处理？已经有10人回复
用pMD-18T simple 双向测序，PCR验证有条带，结果却是空质粒已经有2人回复

船到桥头自然直

1楼 2013-11-22 19:51:43

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

专家经验: +24
MolEPI: 31
应助: 599 (博士)
贵宾: 2.689
金币: 24326.9
散金: 1088
红花: 88
沙发: 2
帖子: 2327
在线: 623.1小时
虫号: 849017
注册: 2009-09-16
性别: GG
专业: 细胞信号转导
管辖: 分子生物

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冰风颤木: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-23 09:39:55

测序从某一段开始出现套峰，可能原因还在于你的样品不是单克隆，可以将你的质粒转化大肠杆菌，然后挑单菌落摇菌抽质粒送测序，可以解决这个问题

套峰不是载体不好测序造成的

学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com

2楼2013-11-23 01:23:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主冰风颤木的主题更新