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ztonyc捐助贵宾 (初入文坛)
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关于构载体过程中PCR验证正确但是测序为空载体的困惑
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各位好， 我在构建3KB以上的片段上终载时，经常发现挑的克隆PCR鉴定大小正确，正负对照也都没问题。但是无论酶切或测序都发现是空载体。 长片段可能构建上会有难度，但是我认为没构建成功应该PCR鉴定该位置也扩不出条带才对。为什么总能扩增出来？而且不同的构建确实P出的条带大小都符合实际的大小。难道未连接上的目的片段也能够转化进入大肠菌中？或者构上的载体有高级结构测序不出？ 小片段构建都没出现过这个问题，真的很想把原因搞清楚，求助于大家！！希望能得到大家的帮助！  |
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