| 查看: 4158 | 回复: 7 | ||
lxyyzz木虫 (小有名气)
|
[求助]
菌液PCR无阳性条带求助！ 已有4人参与
|
|
RT，分子克隆鉴定的时候进行菌液PCR，无阳性条带，后来阳性对照实验如下： 1. 用原始质粒DNA做模板进行PCR，有条带 2. 用原始质粒的甘油菌做模板进行PCR，无条带！ 说明整个菌液PCR过程有问题，包含原始质粒的菌液都无法出现阳性条带。 求助各位可能是哪方面的问题？ （菌液PCR使用2X Taq mix， 使用程序第一步为热变性，95度10分钟和20分钟两个条件我都试过，但原始质粒的菌液PCR都没有条带） |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有276人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有8人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液pcr,坐等求助
已经有20人回复
- PCR片段连接载体，转化不出阳性克隆，求解?
已经有14人回复
- 关于PCR连接后菌液鉴定的问题
已经有18人回复
- 载体构建，测序结果显示目的基因全突变，克隆入T载体，菌液PCR全是假阳性
已经有11人回复
- 菌液PCR出现问题了
已经有23人回复
- 各位大神，求助：PCR产物纯化后没有条带了……
已经有34人回复
- 菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？
已经有13人回复
- 菌液PCR的假阳性是什么原因造成的？
已经有7人回复
- 大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带
已经有5人回复
- 菌液PCR英文怎么翻译
已经有4人回复
- real time PCR NTC 阳性扩增
已经有5人回复
- 挑单克隆后，菌液PCR检测所有条带都偏小，目的条带没有出现
已经有9人回复
- 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带
已经有15人回复
- 转化后菌落pcr有目的条带，小摇长菌，再大摇不长了，求帮助~
已经有14人回复
- 菌液PCR出现杂带是什么原因？
已经有17人回复
- 菌液pcr出来后，质粒提不出，测序老失败？
已经有6人回复
- 菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？
已经有16人回复
- 菌落PCR无条带
已经有19人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 【求助/交流】革兰氏阳性菌PCR问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】关于农杆菌菌液PCR
已经有13人回复
2楼2015-03-31 08:53:53
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxyyzz: 金币+3, ★★★很有帮助, 1. 是普通的Taq聚合酶 2. 除了模板不同之外条件一摸一样，是预混后分装的 3. 无条带的意思是目标条带、杂带都没有 2015-03-31 09:39:24
感谢参与，应助指数 +1
lxyyzz: 金币+3, ★★★很有帮助, 1. 是普通的Taq聚合酶 2. 除了模板不同之外条件一摸一样，是预混后分装的 3. 无条带的意思是目标条带、杂带都没有 2015-03-31 09:39:24
| 2乘Taq mix 是普通的Taq DNA聚合酶吧？？预变性尽然用95℃10-20min？一般的酶变性没有这么长时间啊，一般只有用化学修饰或者抗体修饰的的热启动聚合酶才需要10min吧，你这有条带和无条带，除了模板不同之外其他反应试剂条件都是一样的吗？无条带是没有目的条带出来那有没有杂带呢，也没说啊 |
3楼2015-03-31 09:02:37
781055707
木虫 (著名写手)
- 应助: 291 (大学生)
- 金币: 3118.2
- 散金: 46
- 红花: 19
- 帖子: 2030
- 在线: 579.3小时
- 虫号: 3046113
- 注册: 2014-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2015-03-31 09:23:01
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
5楼2015-03-31 10:16:36
lxyyzz
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3587.6
- 散金: 14
- 帖子: 245
- 在线: 150.6小时
- 虫号: 725367
- 注册: 2009-03-18
- 性别: GG
- 专业: 细胞周期与调控
6楼2015-03-31 11:12:11
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
7楼2015-03-31 13:15:55
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxyyzz: 金币+3, ★有帮助, 1. 我的引物大概40bp左右，菌落PCR不能用长引物是什么原理呢？与质粒PCR有什么不同呢 2. 本来设计的煮样10min是让细菌裂解，使得DNA释放出来作为模板 3. MIX使用的时候是稀释为1X的才用的 2015-03-31 20:43:19
lxyyzz: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 确实是引物的问题。我换了一个短一些的就P出来了，看来是菌液模板太复杂，引物特异性不行的结果。非常感谢！ 2015-04-01 14:16:47
感谢参与，应助指数 +1
lxyyzz: 金币+3, ★有帮助, 1. 我的引物大概40bp左右，菌落PCR不能用长引物是什么原理呢？与质粒PCR有什么不同呢 2. 本来设计的煮样10min是让细菌裂解，使得DNA释放出来作为模板 3. MIX使用的时候是稀释为1X的才用的 2015-03-31 20:43:19
lxyyzz: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 确实是引物的问题。我换了一个短一些的就P出来了，看来是菌液模板太复杂，引物特异性不行的结果。非常感谢！ 2015-04-01 14:16:47
| 你的引物长度多少？菌落pcr不能用长引物的；另外taq的话预变性5min足矣；mix用1*吧，干嘛用2*的呢？ |
8楼2015-03-31 17:14:26
