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樊樊

铜虫 (小有名气)

[求助] 各位大神,求助:PCR产物纯化后没有条带了…… 已有3人参与

目的DNApcr扩增出来条带在1500bp左右,条带明亮单一,符合我的实验要求。p了50微升体系,把产物用全式金纯化试剂盒纯化之后就没有条带了,这是怎么回事啊?第一次失败怀疑是体系浓度太小,所以第二次p了两管平行,同时p的,条带都很正常,纯化依旧没有条带,这是为什么。
各位大神帮帮我。
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樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-05 10:57:03
1、可能你过柱子的时候没把水加到正中间
2、你检测时的上样量太小,本来回收后浓度就很低的

1 是说往柱子里面加样的时候,要悬空滴在柱子中间?   这个确实没有注意到……  汗一个
2 上样量大概多少合适?我只上了三微升,是不是太少了?3微升是因为p好的产物孔里只加这么少
5楼2014-04-05 12:32:32
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樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-05 11:16:12
从两个方面考虑吧:
1. 挂柱没挂上。
2. 洗脱没洗下。
洗脱的话看看洗脱液的PH值是否正确,看看说明书。
实在不行自己配置试剂来纯化把,3M CH3COONa,你在网上搜搜方法。

第一次求助,以为金币是由自己给呢,一不小心全给前面的了,对不住啊
谢谢你的帮助,我今天再试试
9楼2014-04-05 14:56:41
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普通回帖

探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-05 11:04:57
樊樊: 金币+3, 有帮助 2014-04-05 12:34:08
应该是浓度低  你可以浓缩下  或者下次洗的时候少加点水  洗
相信什么才会得到什么
2楼2014-04-05 10:43:30
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-05 11:05:02
樊樊: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-05 12:34:30
1、可能你过柱子的时候没把水加到正中间
2、你检测时的上样量太小,本来回收后浓度就很低的
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
3楼2014-04-05 10:57:03
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-05 14:44:04
从两个方面考虑吧:
1. 挂柱没挂上。
2. 洗脱没洗下。
洗脱的话看看洗脱液的PH值是否正确,看看说明书。
实在不行自己配置试剂来纯化把,3M CH3COONa,你在网上搜搜方法。
4楼2014-04-05 11:16:12
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樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 探花花 at 2014-04-05 10:43:30
应该是浓度低  你可以浓缩下  或者下次洗的时候少加点水  洗

怎么浓缩?洗脱柱子的时候少加点洗脱液吗?我是按照说明书来的……
6楼2014-04-05 12:33:21
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-05 14:44:26
3微升的样品实在是太少了,妹子,下次别省样品。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2014-04-05 13:47:30
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恋琼

铁虫 (初入文坛)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-05 14:44:32
量太少了吧,浓度不够,想亮亮不起来呀

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-04-05 13:59:32
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樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-04-05 13:47:30
3微升的样品实在是太少了,妹子,下次别省样品。

那一般加多少,7微升够不够?检验好纯度后做TA连接
10楼2014-04-05 14:57:41
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