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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
27楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-09 23:52:43
用ddh2o洗脱的么?要不要调节ph?调节的话会不会引入离子会干扰后期的连接,酶切之类的?...

不必调节,一般的无菌水即可
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
31楼2014-04-10 09:32:42
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樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
31楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-10 09:32:42
不必调节,一般的无菌水即可...

好,下次试试
32楼2014-04-10 22:13:43
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樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
29楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-10 00:02:36
连t载体的话,胶回收后,我都不跑电泳,测个浓度直接连接转化,因为连t载体是非常简单,转化效率很高的。
...

我去,我觉得我的实验就是在玩我!今早八点终于看到平板上有那么几个蓝色斑点,绝大部分是半透明白斑,好,我就当转化率高。在液体摇菌的时间空隙,我做了八个白斑、3个蓝斑、1个空白菌落PCR,我去,白斑与蓝斑相差不大,都在250bp左右,(我还旁边点了一个16S的扩增产物,在1500bp左右),marker条带清晰。疑惑如下:
1 假阳性率这么高?我挑的都是空载体?
2 还是我前面纯化PCR产物浓度太低,根本就没有连接上?
我觉得我好像已经没脾气了……
33楼2014-04-10 22:21:44
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lairongpeng

银虫 (正式写手)

引用回帖:
33楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-10 22:21:44
我去,我觉得我的实验就是在玩我!今早八点终于看到平板上有那么几个蓝色斑点,绝大部分是半透明白斑,好,我就当转化率高。在液体摇菌的时间空隙,我做了八个白斑、3个蓝斑、1个空白菌落PCR,我去,白斑与蓝斑相差 ...

用你的原来的目的条带做阳性对照了没有?没有的话,会不会pcr出问题了?阳性的不是白斑吗?挑蓝色的干嘛哦?

[ 发自小木虫客户端 ]
34楼2014-04-11 00:18:37
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lairongpeng

银虫 (正式写手)

引用回帖:
34楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-11 00:18:37
用你的原来的目的条带做阳性对照了没有?没有的话,会不会pcr出问题了?阳性的不是白斑吗?挑蓝色的干嘛哦?
...

上图吧?用的什么引物?M13-47 和RVM吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
35楼2014-04-11 00:22:58
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