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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位大神，求助：PCR产物纯化后没有条带了……
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-09 23:52:43
用ddh2o洗脱的么？要不要调节ph？调节的话会不会引入离子会干扰后期的连接，酶切之类的？...

不必调节，一般的无菌水即可
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
31楼2014-04-10 09:32:42
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樊樊

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
31楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-10 09:32:42
不必调节，一般的无菌水即可...

好，下次试试
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32楼2014-04-10 22:13:43
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樊樊

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
29楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-10 00:02:36
连t载体的话，胶回收后，我都不跑电泳，测个浓度直接连接转化，因为连t载体是非常简单，转化效率很高的。
...

我去，我觉得我的实验就是在玩我！今早八点终于看到平板上有那么几个蓝色斑点，绝大部分是半透明白斑，好，我就当转化率高。在液体摇菌的时间空隙，我做了八个白斑、3个蓝斑、1个空白菌落PCR，我去，白斑与蓝斑相差不大，都在250bp左右，（我还旁边点了一个16S的扩增产物，在1500bp左右），marker条带清晰。疑惑如下：
1 假阳性率这么高？我挑的都是空载体？
2 还是我前面纯化PCR产物浓度太低，根本就没有连接上？
我觉得我好像已经没脾气了……
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33楼2014-04-10 22:21:44
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lairongpeng

银虫 (正式写手)
引用回帖:
33楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-10 22:21:44
我去，我觉得我的实验就是在玩我！今早八点终于看到平板上有那么几个蓝色斑点，绝大部分是半透明白斑，好，我就当转化率高。在液体摇菌的时间空隙，我做了八个白斑、3个蓝斑、1个空白菌落PCR，我去，白斑与蓝斑相差 ...

用你的原来的目的条带做阳性对照了没有？没有的话，会不会pcr出问题了？阳性的不是白斑吗？挑蓝色的干嘛哦？

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34楼2014-04-11 00:18:37
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lairongpeng

银虫 (正式写手)
引用回帖:
34楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-11 00:18:37
用你的原来的目的条带做阳性对照了没有？没有的话，会不会pcr出问题了？阳性的不是白斑吗？挑蓝色的干嘛哦？
...

上图吧？用的什么引物？M13-47 和RVM吗？

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35楼2014-04-11 00:22:58
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