24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3056  |  回复: 34

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

你就扩个8管10管的,最后回收了加40ul溶解,肯定有带。
21楼2014-04-08 21:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-08 19:37:17
你最后的是不是用水洗脱的?你确定自己的Loading buffer没有问题了吗?在最后一部洗脱前要空离的,你有做吗?...

用的试剂盒里面的EB,buffer没问题,只点6*的buffer完全不上漂,我还调整了样品与buffer的比例,依旧上漂。洗脱前10000转空离了2min,为防止乙醇挥发不干净还分别放置了0.5   1小时。电泳缓冲液也是换了新鲜的。我去,我的手是不是被诅咒了?
22楼2014-04-09 15:34:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by 电魂 at 2014-04-08 21:40:37
你不会试剂盒的洗脱液没加无水乙醇吧。

   我肯定加了,这样的错误不会犯得
23楼2014-04-09 15:35:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lairongpeng

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-05 17:29:15
因为回收完做的是TA克隆连接,所以也就想着验证一下...

浓度太低,可能电泳跑不出来。 测一下浓度,直接连T载体,明天做转化,后天挑单克隆,摇菌pcr验证。菌液pcr有就ok。前面不用太纠结。

[ 发自小木虫客户端 ]
24楼2014-04-09 15:39:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-09 15:34:40
用的试剂盒里面的EB,buffer没问题,只点6*的buffer完全不上漂,我还调整了样品与buffer的比例,依旧上漂。洗脱前10000转空离了2min,为防止乙醇挥发不干净还分别放置了0.5   1小时。电泳缓冲液也是换了新鲜的。我 ...

最后我们是用水来洗脱的,我感觉你这一定哪里出问题了,让专家解答一下吧@ biostar2009
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
25楼2014-04-09 18:32:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-09 18:32:21
最后我们是用水来洗脱的,我感觉你这一定哪里出问题了,让专家解答一下吧@ biostar2009...

太感谢你的耐心了,我今天又一次纯化一个,换了别人的试剂盒,别人的buffer,依旧不太行,好一点点的地方就是好像能够微微看到一点点条带,但是很模糊。不知道什么缘故,跑的胶前半部分一整片都是淡淡的荧光色,问实验室老师也是不懂。
实验室成像系统坏掉了,无图无真相。
26楼2014-04-09 23:51:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-09 18:32:21
最后我们是用水来洗脱的,我感觉你这一定哪里出问题了,让专家解答一下吧@ biostar2009...

用ddh2o洗脱的么?要不要调节ph?调节的话会不会引入离子会干扰后期的连接,酶切之类的?
27楼2014-04-09 23:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
24楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-09 15:39:58
浓度太低,可能电泳跑不出来。 测一下浓度,直接连T载体,明天做转化,后天挑单克隆,摇菌pcr验证。菌液pcr有就ok。前面不用太纠结。
...

嗯,我今天就是死马当活马医了,转化,LB平板培养,现在已经12小时了但是上面才微微出现一点点的半透明菌落,上面一点点蓝斑都没有……估计是没有成功,算了,回宿舍睡觉了
28楼2014-04-09 23:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lairongpeng

银虫 (正式写手)

引用回帖:
28楼: Originally posted by 樊樊 at 2014-04-09 23:54:50
嗯,我今天就是死马当活马医了,转化,LB平板培养,现在已经12小时了但是上面才微微出现一点点的半透明菌落,上面一点点蓝斑都没有……估计是没有成功,算了,回宿舍睡觉了...

连t载体的话,胶回收后,我都不跑电泳,测个浓度直接连接转化,因为连t载体是非常简单,转化效率很高的。

[ 发自小木虫客户端 ]
29楼2014-04-10 00:02:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

看样子楼主是对PCR产物进行检测了,产物没有问题,有目标条带,浓度大,还有平行实验!那就是回收出了问题!看看试剂中各液是否沉淀变质,再看看操作过程中是否加错了东西!一切要按照操作说明来,上述虫友说的一些细节只会影影响变量,但不至于一点没有!如果操作无误,估计就是这个盒子有问题,建议楼主用别人的纯化!别花费大量时间找原因!

[ 发自小木虫客户端 ]
特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
30楼2014-04-10 00:58:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 樊樊 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 机械专硕274求调剂,不挑专业学校 +6 泛泛2333 2026-04-05 7/350 2026-04-05 23:20 by chyhaha
[考研] 工科08-机械专硕-求调剂 +3 雷欧飞踢 2026-04-02 3/150 2026-04-05 18:49 by 蓝云思雨
[考研] 301求调剂 +12 121. 2026-04-04 12/600 2026-04-05 09:00 by 来看流星雨10
[考研] 333求调剂 +12 wfh030413@ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 21:02 by jj987
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 材料调剂 +11 吴棂颖! 2026-04-03 11/550 2026-04-04 09:56 by 小小树2024
[考研] 387求调剂 +4 爱吃片豆土 2026-04-03 5/250 2026-04-04 08:10 by 岸上的一条鱼
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +39 洛神哥哥 2026-03-31 41/2050 2026-04-03 21:51 by qlm5820
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 334求调剂 +9 Trying] 2026-03-31 9/450 2026-04-03 15:18 by 琢珥丶
[考研] 274求调剂 +9 顺理成张 2026-04-03 10/500 2026-04-03 15:10 by 啊俊!
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 071000生物学调剂 +8 知昭蔓 2026-04-02 8/400 2026-04-03 10:36 by macy2011
[考研] 272求调剂,接受跨专业调剂! +4 闲鱼卢 2026-03-31 4/200 2026-04-02 11:18 by guyan1000
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 262求调剂 +9 励志一定发文章 2026-03-31 10/500 2026-04-01 12:22 by sunshine0013
[考研] 一志愿北交材料工程总分358 +5 cs0106 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:45 by wangjy2002
[考研] 254材料与化工求调剂 +3 翰冬林楠 2026-03-30 4/200 2026-03-31 17:53 by yishunmin
[考研] 080500-315分复试调剂 +9 上岸3821 2026-03-31 9/450 2026-03-31 17:29 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见