应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位大神，求助：PCR产物纯化后没有条带了……
54/1返回列表
查看: 3537  |  回复: 34
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)

[求助] 各位大神，求助：PCR产物纯化后没有条带了…… 已有3人参与

目的DNApcr扩增出来条带在1500bp左右，条带明亮单一，符合我的实验要求。p了50微升体系，把产物用全式金纯化试剂盒纯化之后就没有条带了，这是怎么回事啊？第一次失败怀疑是体系浓度太小，所以第二次p了两管平行，同时p的，条带都很正常，纯化依旧没有条带，这是为什么。
各位大神帮帮我。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2014-04-05 10:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

樊樊

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
29楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-10 00:02:36
连t载体的话，胶回收后，我都不跑电泳，测个浓度直接连接转化，因为连t载体是非常简单，转化效率很高的。
...

我去，我觉得我的实验就是在玩我！今早八点终于看到平板上有那么几个蓝色斑点，绝大部分是半透明白斑，好，我就当转化率高。在液体摇菌的时间空隙，我做了八个白斑、3个蓝斑、1个空白菌落PCR，我去，白斑与蓝斑相差不大，都在250bp左右，（我还旁边点了一个16S的扩增产物，在1500bp左右），marker条带清晰。疑惑如下：
1 假阳性率这么高？我挑的都是空载体？
2 还是我前面纯化PCR产物浓度太低，根本就没有连接上？
我觉得我好像已经没脾气了……
赞一下 回复此楼
33楼2014-04-10 22:21:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答

探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-05 11:04:57
樊樊: 金币+3, ★有帮助 2014-04-05 12:34:08
应该是浓度低  你可以浓缩下  或者下次洗的时候少加点水  洗
赞一下 回复此楼
相信什么才会得到什么
2楼2014-04-05 10:43:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-05 11:05:02
樊樊: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-05 12:34:30
1、可能你过柱子的时候没把水加到正中间
2、你检测时的上样量太小，本来回收后浓度就很低的
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-04-05 10:57:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-05 14:44:04
从两个方面考虑吧：
1. 挂柱没挂上。
2. 洗脱没洗下。
洗脱的话看看洗脱液的PH值是否正确，看看说明书。
实在不行自己配置试剂来纯化把，3M CH3COONa，你在网上搜搜方法。
赞一下 回复此楼
4楼2014-04-05 11:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[硕博家园] 中科院海洋所招收海洋材料相关领域博士研究生及研究助理 +3 sujiner 2026-10-08 4/200 2026-10-14 20:40 by qicaiyun
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭