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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 各位大神，求助：PCR产物纯化后没有条带了……
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樊樊

铜虫 (小有名气)

[求助] 各位大神，求助：PCR产物纯化后没有条带了…… 已有3人参与

目的DNApcr扩增出来条带在1500bp左右，条带明亮单一，符合我的实验要求。p了50微升体系，把产物用全式金纯化试剂盒纯化之后就没有条带了，这是怎么回事啊？第一次失败怀疑是体系浓度太小，所以第二次p了两管平行，同时p的，条带都很正常，纯化依旧没有条带，这是为什么。
各位大神帮帮我。
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1楼 2014-04-05 10:32:47
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樊樊

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-04-05 10:57:03
1、可能你过柱子的时候没把水加到正中间
2、你检测时的上样量太小，本来回收后浓度就很低的

1 是说往柱子里面加样的时候，要悬空滴在柱子中间？   这个确实没有注意到……  汗一个
2 上样量大概多少合适？我只上了三微升，是不是太少了？3微升是因为p好的产物孔里只加这么少
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5楼2014-04-05 12:32:32
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探花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-04-05 11:04:57
樊樊: 金币+3, ★有帮助 2014-04-05 12:34:08
应该是浓度低  你可以浓缩下  或者下次洗的时候少加点水  洗
赞一下 回复此楼
相信什么才会得到什么
2楼2014-04-05 10:43:30
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-05 11:05:02
樊樊: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-04-05 12:34:30
1、可能你过柱子的时候没把水加到正中间
2、你检测时的上样量太小，本来回收后浓度就很低的
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-04-05 10:57:03
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-05 14:44:04
从两个方面考虑吧：
1. 挂柱没挂上。
2. 洗脱没洗下。
洗脱的话看看洗脱液的PH值是否正确，看看说明书。
实在不行自己配置试剂来纯化把，3M CH3COONa，你在网上搜搜方法。
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4楼2014-04-05 11:16:12
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