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lxyyzz

木虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR无阳性条带求助! 已有4人参与

RT,分子克隆鉴定的时候进行菌液PCR,无阳性条带,后来阳性对照实验如下:
1. 用原始质粒DNA做模板进行PCR,有条带
2. 用原始质粒的甘油菌做模板进行PCR,无条带!
说明整个菌液PCR过程有问题,包含原始质粒的菌液都无法出现阳性条带。
求助各位可能是哪方面的问题?
(菌液PCR使用2X Taq mix,
使用程序第一步为热变性,95度10分钟和20分钟两个条件我都试过,但原始质粒的菌液PCR都没有条带)
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-03-31 10:16:36
一般的扩增还是建议使用热启动聚合酶吧,扩增较有保证,你这个估计真是菌液没有释放出来吧,因为连杂带都没有呢

要怎样才能释放出来?加热10分钟不够么?
6楼2015-03-31 11:12:11
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