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双酶切怎么操作才能完全彻底呢！ 已有7人参与
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我现在正在做双酶切连接，用的是NcoI和PstI这两个酶，首先我是将连有目的基因的质粒进行双酶切，然后将新的片段经双酶切之后连入目的载体（新片段和原来质粒上的片段大小一样，片段1.5kb，质粒剩下部分为6.8kb）转化有转化子，菌落PCR验证正确，但是拿了8个转化子提质粒测序之后发现全是之前的那个旧质粒，现在怀疑是质粒双酶切没有切完全，请问我应该怎么操作才能尽可能保证酶切完全呢 已经纠结了很长时间了，求大神指点 |
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