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双酶切体系构建 新手！
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我是要做载体和目的产物链接 选的是ECOR1 和Xba I TAKARA的 看了说明书，发现buffer不同啊。。。尽管是同一个温度下的，37. 这样我要怎么做呢？ EcoRI 体系 EcoR I 1 μl 10×H Buffer 2 μl DNA ≤1 μg 灭菌水 up to 20 μl 10 × H 500mM Tris-HCl, 100mM MgCl2 10mM Dithiothreitol 1,000mM NaC XbaI 体系 Xba I 1 μl 10×M Buffer 2 μl 0.1% BSA 2 μl DNA ≤1 μg 灭菌水 up to 20 μl 10 × M 100mM Tris-HCl,pH7.5 100 mM MgCl2 10mM Dithiothreitol 500mM NaCl XbaI的那个还要加BSA 我不能换了呀。。因为目的基因的酶切位点是pcr加上去的，前后多加了3个保护碱基。引物都设计好了，就等RNA一提出来，RTPCR一步式完以后直接切了再酶连的。。老师会杀了我的。。我只是本科毕业论文，没人教我。都是自己摸索的。。 难道要分步酶切再回收？重点是我现在那个产物的量还不好说，这样会不会很浪费产物？最后我要做克隆载体的。。 |
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ytxy
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酶切专家
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【答案】应助回帖
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| 如果是新手，可以考虑用double digestion disigner,完全控制你的双酶切，推荐双酶切buffer，精确计算酶的用量，保证载体和外源片段酶切完全。http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/showresult.php |
4楼2013-04-02 22:52:06
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