| 查看: 1231 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
双酶切体系构建 新手！
|
|||
|
我是要做载体和目的产物链接 选的是ECOR1 和Xba I TAKARA的 看了说明书，发现buffer不同啊。。。尽管是同一个温度下的，37. 这样我要怎么做呢？ EcoRI 体系 EcoR I 1 μl 10×H Buffer 2 μl DNA ≤1 μg 灭菌水 up to 20 μl 10 × H 500mM Tris-HCl, 100mM MgCl2 10mM Dithiothreitol 1,000mM NaC XbaI 体系 Xba I 1 μl 10×M Buffer 2 μl 0.1% BSA 2 μl DNA ≤1 μg 灭菌水 up to 20 μl 10 × M 100mM Tris-HCl,pH7.5 100 mM MgCl2 10mM Dithiothreitol 500mM NaCl XbaI的那个还要加BSA 我不能换了呀。。因为目的基因的酶切位点是pcr加上去的，前后多加了3个保护碱基。引物都设计好了，就等RNA一提出来，RTPCR一步式完以后直接切了再酶连的。。老师会杀了我的。。我只是本科毕业论文，没人教我。都是自己摸索的。。 难道要分步酶切再回收？重点是我现在那个产物的量还不好说，这样会不会很浪费产物？最后我要做克隆载体的。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有189人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切后切胶回收
已经有34人回复
- 有谁用过NdeI和XhoI，请教大侠指点，用这两种酶要切多长时间。
已经有5人回复
- 双酶切后目的条带很淡，回收不到
已经有15人回复
- 双酶切没有切开，怎么回事啊
已经有6人回复
- 关于分步双酶切
已经有7人回复
- PET-32a双酶切无法回收
已经有8人回复
- 双酶切
已经有10人回复
- 双酶切，体系，切不出来
已经有10人回复
- 关于酶切的问题
已经有5人回复
- 重组质粒双酶切问题
已经有5人回复
- 双酶切体系是什么意思
已经有7人回复
- 【求助/交流】双酶切大问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】双酶切求助
已经有19人回复
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香。生物版块欢迎你的无私奉献。 2013-04-03 08:40:15
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香。生物版块欢迎你的无私奉献。 2013-04-03 08:40:15
| 如果是新手，可以考虑用double digestion disigner,完全控制你的双酶切，推荐双酶切buffer，精确计算酶的用量，保证载体和外源片段酶切完全。http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/showresult.php |
4楼2013-04-02 22:52:06
ytxy
金虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 1329
- 散金: 741
- 帖子: 109
- 在线: 158.7小时
- 虫号: 652516
- 注册: 2008-11-12
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-04-02 17:37:02
3楼2013-04-02 19:00:26
