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lezhen_22

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有谁用过NdeI和XhoI,请教大侠指点,用这两种酶要切多长时间。

听说NdeI和XhoI这两种酶很难切,是不是真的呢,本人在用这两种酶进行双酶切质粒PET28C,不知道该切多长时间比较合适。如能给出双酶切体系那就更好了。
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raindick1231

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lezhen_22: 金币+1, 有帮助 2013-01-21 19:41:24
我用的Neb的  差不多2h-4h,buffer 和温度都相同
质粒用试剂盒抽的,浓度挺高,25ul体系里面加了5ul
一般的双酶切而已,别紧张,能出来就成,祝好运!
2楼2013-01-21 17:38:52
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

我长期用这两个酶双酶切。3小时。没有问题。
生物资源交流QQ群:1044518333
3楼2013-01-21 18:32:58
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lezhen_22

铁虫 (初入文坛)

本人是初学者,还想问的是,一般应该用多少ml的菌液,才能使得提取的质粒浓度高,以便后面进行双酶切,割胶回收载体,与目的基因连接。
4楼2013-01-21 19:48:30
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guojianping

木虫 (正式写手)

3ml去抽提质粒足够了,如果想浓度高,用手提,试剂盒也行,没问题的,这两个酶都是常用的,NEB的话2小时足够。
5楼2013-01-21 22:16:30
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酶切专家

金虫 (小有名气)

新手可以用doule digestion designer, 小木虫上可以搜到,很方便,可以根据你的实际情况,帮你设计双酶切。good luck.
6楼2013-01-21 22:59:17
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