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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有谁用过NdeI和XhoI，请教大侠指点，用这两种酶要切多长时间。
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lezhen_22

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有谁用过NdeI和XhoI，请教大侠指点，用这两种酶要切多长时间。

听说NdeI和XhoI这两种酶很难切，是不是真的呢，本人在用这两种酶进行双酶切质粒PET28C，不知道该切多长时间比较合适。如能给出双酶切体系那就更好了。
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1楼 2013-01-21 17:01:15
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raindick1231

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lezhen_22: 金币+1, ★有帮助 2013-01-21 19:41:24
我用的Neb的  差不多2h-4h，buffer 和温度都相同
质粒用试剂盒抽的，浓度挺高，25ul体系里面加了5ul
一般的双酶切而已，别紧张，能出来就成，祝好运！
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2楼2013-01-21 17:38:52
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
我长期用这两个酶双酶切。3小时。没有问题。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
3楼2013-01-21 18:32:58
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lezhen_22

铁虫 (初入文坛)
本人是初学者，还想问的是，一般应该用多少ml的菌液，才能使得提取的质粒浓度高，以便后面进行双酶切，割胶回收载体，与目的基因连接。
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4楼2013-01-21 19:48:30
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guojianping

木虫 (正式写手)
3ml去抽提质粒足够了，如果想浓度高，用手提，试剂盒也行，没问题的，这两个酶都是常用的，NEB的话2小时足够。
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5楼2013-01-21 22:16:30
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酶切专家

金虫 (小有名气)
新手可以用doule digestion designer, 小木虫上可以搜到，很方便，可以根据你的实际情况，帮你设计双酶切。good luck.
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6楼2013-01-21 22:59:17
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