6楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-03-10 00:43:41
嗯，那样分的开。如果那十几个碱基都没有酶切位点，就不太好验证了。
...

7楼: Originally posted by 五维度的爱 at 2015-03-10 10:06:35
可以把你酶切后的载体做个转化试下，看是否有菌落长出，这样可以验证下你的载体是否酶切完全了没

9楼: Originally posted by Lylissa at 2015-03-10 11:34:39
想要将两条带跑开，与电压无关，电压只决定跑的速度，与胶浓度有关，胶浓度可以高一点，如1%变为1.5%，时间跑久点...

2楼: Originally posted by 去哪里看海 at 2015-03-09 10:26:32
简单说就是没有连上对吧？我觉得可以从几个方面找原因，比如，片段与质粒的酶切是否充分，片段的浓度与回收状态，质粒的浓度，现在就是你的目的片段和被替代的片段大小一致，所以跑胶看不出来，如果菌批验证，那引物 ...

10楼: Originally posted by zhou325912 at 2015-03-10 12:50:49
引物是没有问题...

17楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-03-10 15:46:35
新片段和旧片段中间不一样的部分序列有没有酶切位点？

18楼: Originally posted by lxyyzz at 2015-03-11 10:14:55
酶切第一个载体质粒时跑胶，然后选取切开的载体片段进行切胶回收，理论上就不会出现测序是原质粒的情况了。
如果想鉴定内切酶是否正常工作，可以设计对照实验：
未酶切质粒
内切酶1单酶切
内切酶2单酶切
观察这 ...