| 查看: 2214 | 回复: 1 | |||
[求助]
质粒ＤＮＡ双酶切，怎么切不开 已有1人参与
|
|
最近把好不容易PCR扩增出了目的条带，连接Ｔ载体（T 载体是T-Easy vector ），转化，菌落ＰＣＲ、提质粒DNA都有条带，在双酶切时，却怎么也切不开，用的酶是Thermo Scientific 的快切酶，Kpn I 和Hind III,反应体系是30ul ,因为提质粒时载体，条带有点暗， 所以双酶切体系是：质粒: 6ul; Kpn I: 1.5ul; Hind III: 1.5ul buffer: 3ul; dd H2O: 18ul; 同时分别用Kpn I 和Hind III 单酶切，反应温度37℃，3个半小时，跑电泳，双酶切，双酶切和原质粒走在同一位置，说明没有切开，改变反应时间5h， 跑电泳就没有条带了，这是怎么回事，很着急，试验又进展不下去了 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有91人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切结果，目的条带有，可是另一条带比原来质粒还要大，怎么解释呢
已经有6人回复
- 双酶切后，质粒条带弥散
已经有13人回复
- 双酶切问题，跪求指导啊
已经有5人回复
- 重组质粒酶切验证没有目的条带
已经有7人回复
- 目的基因连T载体能连上，双酶切后连不上HTB质粒，都三个月了，纠结啊。。。
已经有21人回复
- 关于双酶切作用时间
已经有10人回复
- 为什么单酶切切不开
已经有9人回复
- 提取质粒之后又三条带, 需要切胶回收未开环DNA再进行酶切吗?
已经有10人回复
- 双酶切后目的条带很淡，回收不到
已经有15人回复
- 质粒双酶切。。。。。。。
已经有5人回复
- 双酶切没有切开，怎么回事啊
已经有6人回复
- 做双酶切 跑胶后什么都没有 是怎么回事？
已经有19人回复
- 双酶切，切不下来
已经有19人回复
- 神奇的质粒提取，花儿一样神奇的单酶切跑胶！
已经有34人回复
- 质粒酶切切不动，质粒在宿主中繁衍酶切位点会突变么？
已经有8人回复
- Hind111 与 Not1双酶切请教 急急急！！！
已经有13人回复
- 质粒PCR大小正确，可是双酶切切不开
已经有8人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- 我酶切质粒后，电泳显示没有切开，是不是因为酶在外面放的时间长了？
已经有9人回复
- 质粒DNA用EcoR1和HindⅢ双酶切后电泳图，求鉴
已经有6人回复
- Sau3A I 不完全酶切
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒DNA可以不通过酶切直接跑电泳检测吗？
已经有24人回复
- 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
已经有18人回复
- 【求助/交流】为什么内切酶总是切不开我的DNA
已经有14人回复
- 【求助/交流】为什么酶切总是切不开？
已经有12人回复
gyesang
新虫
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2014-06-25 20:33:39
