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质粒ＤＮＡ双酶切，怎么切不开 已有1人参与
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最近把好不容易PCR扩增出了目的条带，连接Ｔ载体（T 载体是T-Easy vector ），转化，菌落ＰＣＲ、提质粒DNA都有条带，在双酶切时，却怎么也切不开，用的酶是Thermo Scientific 的快切酶，Kpn I 和Hind III,反应体系是30ul ,因为提质粒时载体，条带有点暗， 所以双酶切体系是：质粒: 6ul; Kpn I: 1.5ul; Hind III: 1.5ul buffer: 3ul; dd H2O: 18ul; 同时分别用Kpn I 和Hind III 单酶切，反应温度37℃，3个半小时，跑电泳，双酶切，双酶切和原质粒走在同一位置，说明没有切开，改变反应时间5h， 跑电泳就没有条带了，这是怎么回事，很着急，试验又进展不下去了 |
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gyesang
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