应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酶切片段都切碎了，什么原因
121/2返回列表12下一页
查看: 2256  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

heihei2866

铁虫 (正式写手)

[求助] 酶切片段都切碎了，什么原因 已有1人参与

本人最近在做PCR产物双酶切，本来PCR产物大小在1300 bp，测序验证正确，然后用salI和sphI双酶切后片段只有100bp了，条带非常亮，怀疑是酶切问题，分别用两个酶单酶切，时间也相应缩短，但是结果仍一样；换用了EcoRI和HindIII分别进行单酶切，结果仍一样，这是什么原因啊？之前实在没有碰到过，请各位高手指点一下！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-19 10:49:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
什么情况？你克隆到载体上切下来的吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-19 11:04:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
heihei2866: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-23 12:29:33
你确定基因内部没有所用的酶的酶切位点吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-06-19 11:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heihei2866

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-19 11:04:36
什么情况？你克隆到载体上切下来的吗？

不是，我是用高保真的酶扩增的，PCR产物纯化后直接做酶切
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-19 11:23:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heihei2866

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-19 11:05:16
你确定基因内部没有所用的酶的酶切位点吗？

没有，这个序列测序了，确定没有这些酶切位点
赞一下 回复此楼
5楼2014-06-19 11:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by heihei2866 at 2014-06-19 11:24:23
没有，这个序列测序了，确定没有这些酶切位点...

你不会说的是基因组测序分析的结果吧？那个不一定准的。PCR产物酶切结果发个图过来

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-06-19 12:01:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heihei2866

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-19 12:01:19
你不会说的是基因组测序分析的结果吧？那个不一定准的。PCR产物酶切结果发个图过来
...

不是基因组测序结果，是PCR产物纯化后测序的结果，证明没有酶切位点，唉，酶切前后的电泳图如附图所示，我感觉是PCR产物被切碎了，只是找不到原因
酶切片段都切碎了，什么原因
酶切.png
赞一下 回复此楼
7楼2014-06-19 16:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
heihei2866(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:43:48
引用回帖:
7楼: Originally posted by heihei2866 at 2014-06-19 16:27:18
不是基因组测序结果，是PCR产物纯化后测序的结果，证明没有酶切位点，唉，酶切前后的电泳图如附图所示，我感觉是PCR产物被切碎了，只是找不到原因

酶切.png
...

你这样太折腾啦，直接克隆到t载体，测序对了，将片段从t载体上切下来，稳妥点，你测了序列，又要这个基因，策略选的不好哦。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-19 16:31:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heihei2866

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-19 16:31:27
你这样太折腾啦，直接克隆到t载体，测序对了，将片段从t载体上切下来，稳妥点，你测了序列，又要这个基因，策略选的不好哦。
...

呵呵，因为当时没有T-blunt载体，所以想直接酶切PCR产物做连接，我们之前这样做都没有问题的，就是现在出现这种奇怪的现象
赞一下 回复此楼
9楼2014-06-19 16:39:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
heihei2866(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:44:00
引用回帖:
9楼: Originally posted by heihei2866 at 2014-06-19 16:39:54
呵呵，因为当时没有T-blunt载体，所以想直接酶切PCR产物做连接，我们之前这样做都没有问题的，就是现在出现这种奇怪的现象...

可以用taq加a或者直接用taq扩，平末端的载体有点小贵，平末端克隆没ta好做哦

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2014-06-19 16:45:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 heihei2866 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:22 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:19 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +5 布布和一二 2026-08-08 8/400 2026-08-08 14:54 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭