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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)

[求助] 为什么酶切会出现这种情况,请各位好人帮忙解答

内容是部分酶切预实验,酶为sau3AI,第一管酶切体系20ul,1.5ulDNA,0.5ul的sua3AI,后面只是酶的浓度变化,以1/2稀释,最后一个是空白对照,没有加入酶,不知道为什么前面的几个管加了酶出现了这种情况,请高人帮忙解释,谢谢

Administrator 2013-03-11 15 小时 57 分钟.jpg
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woke2008

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-15 12:52:37
1)这个片段上sau3AI的酶切位点是否单一~~
2)takara的没有快切酶,请确定酶的使用方法~~
3)同时操作其他的酶切,验证操作无误~
4)重新制备片段,虽然看上去不像是降解,但是以防万一~
目前只能想到这些,希望有帮助~
忘记了该怎么忘记该怎么办!
6楼2013-03-12 13:50:29
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普通回帖

luhaoHuang

铜虫 (小有名气)

酶切时间为10min
2楼2013-03-11 18:52:47
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切时间是10min,第一次见这么短时间的酶切,你确定这样可以切开么?酶多了是浪费,少了是切的不彻底。可以多点时间试试。
做出色的科研人
3楼2013-03-11 19:46:08
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-03-11 19:46:08
酶切时间是10min,第一次见这么短时间的酶切,你确定这样可以切开么?酶多了是浪费,少了是切的不彻底。可以多点时间试试。

还不知道呀,所以是在摸索中,这次用的酶是takara,以前是NEB10min是可以的,出现这种情况很郁闷,希望有经验的帮忙解答,谢谢
4楼2013-03-11 23:28:30
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)

请各位高手伸出援助之手
5楼2013-03-12 12:21:41
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-03-11 19:46:08
酶切时间是10min,第一次见这么短时间的酶切,你确定这样可以切开么?酶多了是浪费,少了是切的不彻底。可以多点时间试试。

我们都用了thermo的内切酶了,只需要5min,快切,效果很好。
总有一天我要修改用户名。
7楼2013-03-12 17:53:40
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
与空白相比,可以看出已经完全切开了,你要考虑是否是单一酶切位点
总有一天我要修改用户名。
8楼2013-03-12 17:57:02
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by woke2008 at 2013-03-12 13:50:29
1)这个片段上sau3AI的酶切位点是否单一~~
2)takara的没有快切酶,请确定酶的使用方法~~
3)同时操作其他的酶切,验证操作无误~
4)重新制备片段,虽然看上去不像是降解,但是以防万一~
目前只能想到这些,希望 ...

谢谢,会去注意
9楼2013-03-13 00:00:38
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jw1985629

新虫 (初入文坛)

估计是进水了。。。。
i still have so much to do
10楼2013-03-14 20:42:42
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