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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么酶切会出现这种情况，请各位好人帮忙解答
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)

[求助] 为什么酶切会出现这种情况，请各位好人帮忙解答

内容是部分酶切预实验，酶为sau3AI,第一管酶切体系20ul，1.5ulDNA，0.5ul的sua3AI，后面只是酶的浓度变化，以1/2稀释，最后一个是空白对照，没有加入酶，不知道为什么前面的几个管加了酶出现了这种情况，请高人帮忙解释，谢谢

Administrator 2013-03-11 15 小时 57 分钟.jpg
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1楼 2013-03-11 18:52:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

woke2008

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-15 12:52:37
1）这个片段上sau3AI的酶切位点是否单一~~
2）takara的没有快切酶，请确定酶的使用方法~~
3）同时操作其他的酶切，验证操作无误~
4）重新制备片段，虽然看上去不像是降解，但是以防万一~
目前只能想到这些，希望有帮助~
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忘记了该怎么忘记该怎么办！
6楼2013-03-12 13:50:29
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普通回帖

luhaoHuang

铜虫 (小有名气)
酶切时间为10min
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2楼2013-03-11 18:52:47
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切时间是10min，第一次见这么短时间的酶切，你确定这样可以切开么？酶多了是浪费，少了是切的不彻底。可以多点时间试试。
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做出色的科研人
3楼2013-03-11 19:46:08
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-03-11 19:46:08
酶切时间是10min，第一次见这么短时间的酶切，你确定这样可以切开么？酶多了是浪费，少了是切的不彻底。可以多点时间试试。

还不知道呀，所以是在摸索中，这次用的酶是takara，以前是NEB10min是可以的，出现这种情况很郁闷，希望有经验的帮忙解答，谢谢
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-11 23:28:30
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)
请各位高手伸出援助之手
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5楼2013-03-12 12:21:41
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137167741

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-03-11 19:46:08
酶切时间是10min，第一次见这么短时间的酶切，你确定这样可以切开么？酶多了是浪费，少了是切的不彻底。可以多点时间试试。

我们都用了thermo的内切酶了，只需要5min，快切，效果很好。
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总有一天我要修改用户名。
7楼2013-03-12 17:53:40
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
与空白相比，可以看出已经完全切开了，你要考虑是否是单一酶切位点
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
8楼2013-03-12 17:57:02
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luhaoHuang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by woke2008 at 2013-03-12 13:50:29
1）这个片段上sau3AI的酶切位点是否单一~~
2）takara的没有快切酶，请确定酶的使用方法~~
3）同时操作其他的酶切，验证操作无误~
4）重新制备片段，虽然看上去不像是降解，但是以防万一~
目前只能想到这些，希望 ...

谢谢，会去注意
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9楼2013-03-13 00:00:38
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jw1985629

新虫 (初入文坛)
估计是进水了。。。。
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i still have so much to do
10楼2013-03-14 20:42:42
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