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opt0708

新虫 (初入文坛)

[求助] Sau3A1酶切遇到了问题~求高手解答

提取土壤基因组DNA,切胶纯化后,做Sau3A1酶切,但是试了几种酶切条件,都没有切成,琼脂糖检测的时候,泳道是完全空白的,基因组DNA也没有,有没有做过的人指点一下啊~还有应用的酶切体系和时间
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: MolEPI+1, 神仙级别的人物 可否考虑做我们的专家 2012-12-07 14:36:13
opt0708: 金币+25, ★★★★★最佳答案 2012-12-25 13:03:27
1. 提取土壤基因组DNA,为什么要切胶纯化?我觉得你提完基因组就OK了,不需要非把完整的带切出来

2. 做Sau3A1酶切,但是试了几种酶切条件,都没有切成,琼脂糖检测的时候,泳道是完全空白的,基因组DNA也没有
根据你的描述你的Sau3A1可能存在核酸酶污染把你的DNA降解了,所以跑胶后泳道完全空白,还有你先要确定你提到了基因组DNA,如果你酶切时,本来就没有DNA,到时候电泳时泳道完全空白那也正常

附一张Sau3AI酶切后,DNA跑胶效果图,应该是整个胶都有DNA才对
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2012-12-07 14:33:16
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普通回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是你的基因组被切碎了,一般这个酶的最适作用浓度是0.04u/ug.你可以做一个酶浓度的梯度,两倍两倍的稀释。看哪个效果最好,然后大量酶切。
nothing isimpossible
2楼2012-12-07 13:23:17
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opt0708

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-07 14:33:16
1. 提取土壤基因组DNA,为什么要切胶纯化?我觉得你提完基因组就OK了,不需要非把完整的带切出来

2. 做Sau3A1酶切,但是试了几种酶切条件,都没有切成,琼脂糖检测的时候,泳道是完全空白的,基因组DNA也没有
根 ...

我下一步连接载体,是要把我需要的范围的胶都切下来纯化吗
4楼2012-12-25 13:05:54
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