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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Sau3A1酶切遇到了问题~求高手解答
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opt0708

新虫 (初入文坛)

[求助] Sau3A1酶切遇到了问题~求高手解答

提取土壤基因组DNA，切胶纯化后，做Sau3A1酶切，但是试了几种酶切条件，都没有切成，琼脂糖检测的时候，泳道是完全空白的，基因组DNA也没有，有没有做过的人指点一下啊~还有应用的酶切体系和时间
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1楼 2012-12-07 09:12:45
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opt0708

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-07 14:33:16
1. 提取土壤基因组DNA，为什么要切胶纯化？我觉得你提完基因组就OK了，不需要非把完整的带切出来

2. 做Sau3A1酶切，但是试了几种酶切条件，都没有切成，琼脂糖检测的时候，泳道是完全空白的，基因组DNA也没有
根 ...

我下一步连接载体，是要把我需要的范围的胶都切下来纯化吗
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4楼2012-12-25 13:05:54
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是你的基因组被切碎了，一般这个酶的最适作用浓度是0.04u/ug.你可以做一个酶浓度的梯度，两倍两倍的稀释。看哪个效果最好，然后大量酶切。
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nothing isimpossible
2楼2012-12-07 13:23:17
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: MolEPI+1, 神仙级别的人物 可否考虑做我们的专家 2012-12-07 14:36:13
opt0708: 金币+25, ★★★★★最佳答案 2012-12-25 13:03:27
1. 提取土壤基因组DNA，为什么要切胶纯化？我觉得你提完基因组就OK了，不需要非把完整的带切出来

2. 做Sau3A1酶切，但是试了几种酶切条件，都没有切成，琼脂糖检测的时候，泳道是完全空白的，基因组DNA也没有
根据你的描述你的Sau3A1可能存在核酸酶污染把你的DNA降解了，所以跑胶后泳道完全空白，还有你先要确定你提到了基因组DNA，如果你酶切时，本来就没有DNA，到时候电泳时泳道完全空白那也正常

附一张Sau3AI酶切后，DNA跑胶效果图，应该是整个胶都有DNA才对
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2012-12-07 14:33:16
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