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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

[求助] 求助:酶切下来的片段比PCR片段大100多bp是怎么回事,怎么解决这个问题。 已有3人参与

我用的载体是宝生物 PMD 18-T SIMPLE VECTOR.
酶切的酶是Promega的。
PCR时,片段的位置很准确,但是和载体连完再切时,就发现切下来的片段比PCR时的大了100多。
一开始怀疑是点样的问题,于是换了1管溴酚蓝,结果仍偏大。
换用6X LOADING BUFFER ,结果略好一点点,比用溴酚蓝时小了一点,但是由于我的目的片段是693和795,即使用了6X LOADING BUFFER酶切条带仍在750mark上面。
有没有哪位前辈遇到过这种问题,求指教。
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-13 20:48:45
你PCR产物上带酶切位点还是利用载体上的。选两个测序看看。
hehe
2楼2014-01-13 20:09:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-14 08:32:42
酶切后的产物含盐量可能较高,会影响DNA的迁移率,从胶上观测的分子量未必准确。你可以继续克隆,以测序结果为准。
3楼2014-01-14 00:03:12
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冷眼倦天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-28 17:54:09
酶切时的盐离子会影响条带的大小,这是很正常的,不是你的实验的问题,这个问题应该是经常遇到的,链接完毕之后,可以通过测序比对序列来判定结果!!
4楼2014-01-14 10:44:09
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-14 00:03:12
酶切后的产物含盐量可能较高,会影响DNA的迁移率,从胶上观测的分子量未必准确。你可以继续克隆,以测序结果为准。

太感谢了,您这么说给了我很大的信心!
5楼2014-01-14 10:44:33
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