应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR和酶切实验
61/1返回列表
查看: 1332  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jasminezhao

金虫 (小有名气)

[交流] PCR和酶切实验 已有5人参与

我有一个问题，就是我的载体含有两个sfiI酶切位点，并且正好是位于目的基因的两端，我为什么不能直接用酶切发法获得目的基因，而是要用PCR法获得目的基因后再酶切呢？我们教授要我这样做，但是我不是很理解，这样不更麻烦吗？有哪位大侠做过类似的实验还望指点迷津啊！！谢谢啦！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-23 10:46:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kx444555

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:10:50
估计你们教授的意思是把整个ORF给扩增下来，加另外的酶切位点，如果用同一种酶切的话，插入方向还要后续确定，
再说你不用PCR你怎么大量扩增目的基因用来酶切呢？
赞一下(1人) 回复此楼
星陈代谢
2楼2013-05-23 11:26:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-24 03:10:58
直接酶切下来可能对后续实验不利。比方说可能是要做表达，需要根据表达载体设计合适的酶切位点。
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-23 13:11:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjtu0025

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你切下来是要干啥呀....PCR不是只是得到产物而已,一般都带有大量扩增和改造
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-23 19:02:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

野草99688

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
呵呵！你的目的片段如果实在松弛型质粒上，扩增后就不必再PCR啦！直接酶切纯化即可，但是你的目的片段如果实在严谨性质粒上，本来目的片段就很少，你在酶切，根本就检测不到，跟别说做其他试验啦，PCR可以加入酶切位点，也可以防止自身连接等。PCR扩增后获得大量序列，这样才能进行下一步操作呀！呵呵
1鄙人拙见，若有不对，还请指教呀！
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-24 09:06:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

咆粑

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果你用sfiI酶切得到目的片段了，这个片段能不能再连到另外一个你需要连到载体上呢？
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-24 10:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jasminezhao 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 求调剂 +3 清风问长安 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:15 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 材料调剂，307分 +13 张泳铭1 2026-03-09 17/850 2026-03-13 11:09 by 薛云鹏
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭