应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR鉴定与酶切鉴定
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/1返回列表
查看: 2437  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苏拉的世界

金虫 (著名写手)

[交流] PCR鉴定与酶切鉴定

构建了一个表达载体，特别特别的闹心，以为弄好了呢，PCR鉴定的时候都会有目的条带，但是酶切的时候就没有了，呢呢呢。气死我了，是当它存在还是不存在，我要疯掉了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-06-21 10:19:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)
★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
苏拉的世界(金币+1): 嗯，那你说是哪个的问题 2011-06-21 10:55:10
你鉴定的时候用载体上的引物
抽的质粒纯度要高
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-21 10:34:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuaannie

新虫 (初入文坛)
★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
鉴定采用载体上面的引物，注意是否同尾酶连接，
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-21 13:26:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
苏拉的世界(金币+1):谢谢参与
PCR只能初选，必须以酶切为准，酶切对了，然后送去测序。最后的测序结果才是可靠的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-21 14:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-06-21 14:28:41:
PCR只能初选，必须以酶切为准，酶切对了，然后送去测序。最后的测序结果才是可靠的。

为什么切不出来，哼，我要疯了
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-21 15:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
苏拉的世界(金币+1): 恩谢谢，哎。。。 2011-06-21 18:15:41
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-06-21 18:26:26
是这样的，一般PCR鉴定的假阳性很高。
我一般就是只有样本数很多的时候才用菌液做PCR，初步鉴定，然后再阳性的里面提质粒，酶切鉴定。如果样本少，就直接提质粒，酶切鉴定。据我做PCR鉴定很多次得经验来看，PCR鉴定的假阳性确实很高。不太可信
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-06-21 17:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuzuobin125

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼主不用太烦恼嘛，
如果是你的酶切体系和操作没有问题，那你就需要重新构建载体，重新来过了，其实也没有什么啊，生物实验就是要不断的重复的。
楼上很多童鞋们都很有经验了，PCR鉴定的假阳性机率甚高，不能以此为准，既然如此，那么是否说明楼主的载体构建没有成功呢？
我实验时都不考虑构建载体后进行PCR 鉴定，一般转化后挑取单菌落培养，提取质粒后酶切鉴定。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-06-21 21:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wuzuobin125 at 2011-06-21 21:06:14:
楼主不用太烦恼嘛，
如果是你的酶切体系和操作没有问题，那你就需要重新构建载体，重新来过了，其实也没有什么啊，生物实验就是要不断的重复的。
楼上很多童鞋们都很有经验了，PCR鉴定的假阳性机率甚高，不能以 ...

嗯，谢谢您了，只是您不知道我这个载体构建的有多困难。。。
赞一下 回复此楼
8楼2011-06-22 09:03:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-06-21 17:13:27:
是这样的，一般PCR鉴定的假阳性很高。
我一般就是只有样本数很多的时候才用菌液做PCR，初步鉴定，然后再阳性的里面提质粒，酶切鉴定。如果样本少，就直接提质粒，酶切鉴定。据我做PCR鉴定很多次得经验来看，PCR鉴 ...

嗯。。。谢谢您了。。。
回复此楼
9楼2011-06-22 09:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
PCR有条带，当然是确定是对的为前提，酶切有没有可能存在一下问题：
1.目的片段中是否存在你的酶切位点
2.连接体系是否正确
3.如果做的是很常规的重组质粒构建的话，直接提质粒就可以看到是否有重组质粒存在，否则可以做下菌落PCR，确定有阳性存在在提质粒做进一步的酶切鉴定，做菌落PCR时也要注意下方法，做不好假阳性出现几率很大。
最主要是确定下问题1，如果排除这点的话问题还是不大，重新连接做就可以了，如果连接效率不好，可以走下T载体，虽然麻烦些，但是是个很有用的方法。
祝实验顺利，我做的时候也是很纠结的，花了很久才弄出来，嘿嘿！
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-06-22 09:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏拉的世界

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-06-22 09:38:35:
PCR有条带，当然是确定是对的为前提，酶切有没有可能存在一下问题：
1.目的片段中是否存在你的酶切位点
2.连接体系是否正确
3.如果做的是很常规的重组质粒构建的话，直接提质粒就可以看到是否有重组质粒存在， ...

谢谢您啦
回复此楼
11楼2011-06-22 09:47:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biobiobio

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你这个载体构建是如此费劲，是因为你没有用ClonExpress
菌落PCR，酶切鉴定如果都过关了，基本可以宣告你的实验成功了。
赞一下 回复此楼
12楼2012-11-26 20:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 苏拉的世界 的主题更新
121/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工专硕306分找合适调剂 +6 沧海轻舟e 2026-04-06 6/300 2026-04-06 10:02 by lqwchd
[考研] 086000生物与医药求调剂 +3 老天眷顾之人 2026-03-31 3/150 2026-04-05 22:24 by syh9288
[考研] 本科211，293分请求调剂 +8 莲菜就是藕吧 2026-04-03 9/450 2026-04-05 19:12 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿南航，数一英一学硕317求调剂！！ +5 Acaciad 2026-04-04 5/250 2026-04-05 12:31 by 搏击518
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-04 4/200 2026-04-05 09:44 by zhq0425
[考研] 可跨专业调剂 +3 周的得地 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:21 by barlinike
[考研] 278求调剂 +14 范婷娜 2026-04-04 15/750 2026-04-04 22:15 by lqwchd
[考研] 085602 找调剂 +4 逆时针快乐 2026-04-02 4/200 2026-04-04 19:32 by 蓝云思雨
[考研] 怎么删帖子啊 +3 缝曦1000 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:20 by 土木硕士招生
[考研] 求调剂，一志愿南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-04-03 10/500 2026-04-04 09:01 by T可可西里T
[考研] 考研求调剂 +3 木心想继续深造 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:56 by 啵啵啵0119
[基金申请] esi高被引论文是不是能对中标有所加分和帮助呢 +5 redcom 2026-04-01 6/300 2026-04-03 15:15 by Howard28
[考研] 11408，284分，二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 08工科275分求调剂 +14 AaAa7420 2026-03-31 14/700 2026-04-03 11:13 by cocolv
[考研] 调剂 +3 osbbx 2026-04-02 3/150 2026-04-03 07:47 by cc8418
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-02 11:31 by lnilvy
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 0805求调剂 +8 是水分 2026-03-31 8/400 2026-04-02 10:46 by guanxin1001
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
[考研] 吉大生物学326分求调剂 +3 sunnyupup 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:28 by longlotian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭