| 查看: 4589 | 回复: 35 | ||
西门炊饼铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
关于筛选和鉴定细菌(16S rRNA)
|
|
|
目前我的实验需要将样品中细菌分离出来并鉴定，希望能分离出我感兴趣的菌，如果能发现新细菌就更好了，对于如何筛选和鉴定，我有这样的难题： 感觉用Vitek-2自动分析仪鉴定菌工作量太大，而且费时间，首先得将样品用几种增菌液增菌，然后增菌液又划到几种筛选平板上，平板上挑单菌落划线，接种3代以上纯化，然后革兰氏染色（这步工作量大），最后拿去全自动微生物分析仪上去分析，鉴定卡贵，还不一定能全给鉴定出来，忒麻烦。往往一天要划上百块平板，如果做得多，更恐怖。 我的目的是筛菌，理想结果是筛到我感兴趣的菌，或者是新细菌。现在琢磨着用扩增16S rRNA，然后去测序的方法来筛菌，最后再拿去微生物自动分析，这样筛到新细菌的可能性大。我准备这么做，开始的步骤一样，首先得将样品用几种增菌液增菌，然后增菌液又划到几种筛选平板上，这时不挑单菌落纯化了，直接将筛选平板上的有代表性的单菌落（初步定为一块板10个左右，用以前的办法只能挑1-3个，不然工作量会吓死人）挑到盛有营养肉汤的EP管里去摇，摇好了后直接拿去菌液PCR，引物用16S rRNA的通用引物，扩增好了就送去测序。 不知道这样的方法是否可行，敬请高人指点，恳请大家畅所欲言。我知道这个方法存在的一个问题：首先，我挑到的单菌落有可能不是单种细菌，可能是两种甚至多种细菌，这样菌液PCR扩增出来的就不是一种片段，而是几种片段，由于我不太清楚测序的过程，这种情况下测序会测出什么结果我也无法预计。强调一点：我的目的是筛菌，不是一定要把每个都准确的测出来。 [ Last edited by 西门炊饼 on 2011-8-29 at 13:54 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
（调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生
已经有4人回复
-
085602调剂 初试总分335
已经有8人回复
-
材料求调剂
已经有8人回复
-
求调剂
已经有7人回复
-
277求调剂
已经有6人回复
-
求调剂
已经有5人回复
-
一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂
已经有10人回复
-
283求调剂
已经有6人回复
-
一志愿郑州大学085600求调剂
已经有8人回复
-
285求调剂
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何从土壤中筛选酵母菌株，并进行相关鉴定？
已经有22人回复
- 菌种鉴定怎样选取培养基
已经有6人回复
- 微生物多样性研究的几个问题
已经有10人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 求助高人，筛菌问题，怎么选择鉴别培养基
已经有5人回复
- 关于菌株16SrDNA序列鉴定的问题
已经有4人回复
- 在基因重组过程中，怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好？
已经有10人回复
- 细菌筛选鉴定的文章，比较容易发的SCI杂志有哪些
已经有3人回复
| 你好，微生物分离鉴定可分为可培养微生物鉴定和不可培养微生物鉴定。可培养法是需要必须经过细心培养和纯化。而不可培养法不需要分离，只是把总DNA提取进行PAGE电泳即可得到样品中的细菌类型。但不能获得菌落的信息。从你的描述来看你是想做可培养细菌的鉴定，那么必须经过细心培养，纯化和鉴定。如果你的目的是分离有意义的细菌那么要用两种以上的培养基，觉得工作量多可选择一种培养基（注意不要用LB和TSA培养基），最好是适合你的样品生长的培养基（需自己查资料）。另外我建议你你所说的VITEK2，COMPAT等仪器是人体微生物检验专用，含有少数工业微生物，不适合土壤微生物。所以你要考虑你的样品和你想获得什么类型的微生物。 |
16楼2011-09-02 01:47:15
yemuren
铁杆木虫 (正式写手)
- MicEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 9352.9
- 散金: 20
- 帖子: 325
- 在线: 2370.2小时
- 虫号: 926290
- 注册: 2009-12-12
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
12楼2011-08-31 10:38:35
粉靛蓝
木虫 (著名写手)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2812.5
- 散金: 564
- 红花: 5
- 帖子: 1145
- 在线: 398小时
- 虫号: 764757
- 注册: 2009-05-07
- 专业: 食品科学
2楼2011-08-29 15:50:53
西门炊饼
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 53.5
- 帖子: 26
- 在线: 12.6小时
- 虫号: 1382807
- 注册: 2011-08-29
- 性别: GG
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
3楼2011-08-29 16:40:50
粉靛蓝
木虫 (著名写手)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2812.5
- 散金: 564
- 红花: 5
- 帖子: 1145
- 在线: 398小时
- 虫号: 764757
- 注册: 2009-05-07
- 专业: 食品科学
4楼2011-08-29 16:47:30
5楼2011-08-29 21:25:56
aegeansea
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 394.5
- 散金: 18
- 帖子: 108
- 在线: 61小时
- 虫号: 459531
- 注册: 2007-11-14
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
6楼2011-08-30 11:26:58
quiller2000
木虫 (著名写手)
- MicEPI: 3
- 应助: 160 (高中生)
- 贵宾: 0.114
- 金币: 2752.9
- 散金: 50
- 红花: 26
- 帖子: 1168
- 在线: 167.3小时
- 虫号: 895537
- 注册: 2009-11-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
7楼2011-08-30 23:27:17
西门炊饼
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 53.5
- 帖子: 26
- 在线: 12.6小时
- 虫号: 1382807
- 注册: 2011-08-29
- 性别: GG
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
8楼2011-08-31 08:49:51
西门炊饼
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 53.5
- 帖子: 26
- 在线: 12.6小时
- 虫号: 1382807
- 注册: 2011-08-29
- 性别: GG
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
9楼2011-08-31 08:53:32
西门炊饼
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 53.5
- 帖子: 26
- 在线: 12.6小时
- 虫号: 1382807
- 注册: 2011-08-29
- 性别: GG
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
10楼2011-08-31 08:54:18
