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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于筛选和鉴定细菌(16S rRNA)
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西门炊饼

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by nancyyazi at 2011-09-08 09:04:04:
我觉得你既然是分离细菌（我不清楚你要分离的是什么细菌），至少要经过初筛和复筛吧。筛选出来比较好的也就那么几株，你再进行生理生化鉴定和16s RNA，这样工作量就会小很多。

什么叫初筛和复筛，比较好的标准是什么？能说详细点吗？
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21楼2011-09-09 08:46:48
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nancyyazi

铜虫 (小有名气)
★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-24 17:12:45
我不清楚你要分离得到什么菌 有选择性的筛选 初筛一般是选择性培养基上 复筛方法取决于你的菌 这需要查资料 举个例子 比如要分离产蛋白酶的菌 初筛就是将样品稀释液涂布在酪蛋白平板 透明圈大的菌再用福林酚法复筛 选择你最想要的菌进行生理生化鉴定和分子鉴定 我是这么认为的

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22楼2011-09-14 01:45:09
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nancyyazi

铜虫 (小有名气)
我不清楚你要分离得到什么菌 有选择性的筛选 初筛一般是选择性培养基上 复筛方法取决于你的菌 这需要查资料 举个例子 比如要分离产蛋白酶的菌 初筛就是将样品稀释液涂布在酪蛋白平板 透明圈大的菌再用福林酚法复筛 选择你最想要的菌进行生理生化鉴定和分子鉴定 我是这么认为的

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23楼2011-09-14 01:50:33
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kingleo99

木虫 (小有名气)
★
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-24 17:13:09
你的那种方法是可行的，但是比较繁琐，你可以直接挑去微量的菌落直接加入PCR管中作为模板，后续直接PCR扩增就好了。给你个建议，你可以参考下：方便节省时间又不浪费钱，对筛选出来的细菌菌落按形态可以进行划分，但是一些细菌由于外部形态一样所以你可以挑去出相同菌落形态，颜色菌按照上述的方法进行PCR扩增，然后进行限制性酶切，如果菌不同的话那么酶切条带不同，这样就会减少很多类群的认为丢失，并且不必要每个菌都送去测序，节省金钱。如果你们有钱那按照上述方法全部送去测序那是最简单的方法。
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科学就是发现规律，而规律是上帝创造的，认识独一上帝就是智慧。
24楼2011-12-24 16:21:24
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wen6167

铁虫 (初入文坛)
同意21L童鞋的建议，目前不清楚你所谓的有意思的菌倒底是指什么样的菌。如果是有特殊通途的可以先加个筛子，如21L童鞋所讲。如果是找新菌，分离纯化测16S rRNA不可避免。
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25楼2012-01-10 22:38:48
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
看到这个老帖，很有感觉。我们做的工作很多是涉及这个方面的，基本的过程就是这样。

分离纯化细菌——纯培养——vitek II鉴定，同时PCR，16srDNA鉴定。

一般最少同时也得做个几十株菌吧，费钱费时费力。

除了如此，还能怎样做？
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环境卫生、微生物学、卫生应急
26楼2012-04-27 08:45:55
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
当然我的做的目的不是分离新的菌株，而是尽可能的将某一环境中的细菌（需氧菌）全部分离鉴定出来。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
27楼2012-04-27 08:55:30
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zqp9110

金虫 (正式写手)
搜Vitek看到这个帖子，也想说几句。
一般来说很难用单独一种培养基把一个复杂样本里的所有或者大部分菌培养出来吧。
如果是环境样品，觉得先做个质问图谱比较好，先把样品中所有的菌种类数量看个大概，比如用DGGE。如果是按LZ的方法，直接上来就分离，可以得到菌落之后做ERIC-PCR，先将得到的各个但菌落进行归并分型，ERIC-PCR的分辨率还是挺高的，可以达到种水平。然后每个类型的菌再挑代表菌株拿去测16S，如果是感兴趣的菌再做进一步深入鉴定，可以减少测序工作量。
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BEYOND
28楼2012-10-08 20:51:59
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xxlin0108

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by drizzling at 2011-08-29 21:25:56
挑到单个菌落后不必摇菌，直接取单克隆悬起来，做PCR即可，不过原始平板上一定要标注好，否则就搞昏了。要不然就重新取一块平板，划上格子，重新接种一下，取少量菌苔，重悬进行PCR。

你好，能具体说说“直接取单克隆悬起来，做PCR即可”是什么意思吗，具体实验过程。
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29楼2013-05-16 14:30:38
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drizzling

金虫 (小有名气)
用枪头或牙签挑一点菌，重悬到100-200微升水中，沸水浴5 min，离心，取上清5微升PCR
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30楼2013-05-17 16:37:48
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