| 查看: 3538 | 回复: 35 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
西门炊饼铁虫 (初入文坛)
|
[求助]
关于筛选和鉴定细菌(16S rRNA)
|
|
|
目前我的实验需要将样品中细菌分离出来并鉴定，希望能分离出我感兴趣的菌，如果能发现新细菌就更好了，对于如何筛选和鉴定，我有这样的难题： 感觉用Vitek-2自动分析仪鉴定菌工作量太大，而且费时间，首先得将样品用几种增菌液增菌，然后增菌液又划到几种筛选平板上，平板上挑单菌落划线，接种3代以上纯化，然后革兰氏染色（这步工作量大），最后拿去全自动微生物分析仪上去分析，鉴定卡贵，还不一定能全给鉴定出来，忒麻烦。往往一天要划上百块平板，如果做得多，更恐怖。 我的目的是筛菌，理想结果是筛到我感兴趣的菌，或者是新细菌。现在琢磨着用扩增16S rRNA，然后去测序的方法来筛菌，最后再拿去微生物自动分析，这样筛到新细菌的可能性大。我准备这么做，开始的步骤一样，首先得将样品用几种增菌液增菌，然后增菌液又划到几种筛选平板上，这时不挑单菌落纯化了，直接将筛选平板上的有代表性的单菌落（初步定为一块板10个左右，用以前的办法只能挑1-3个，不然工作量会吓死人）挑到盛有营养肉汤的EP管里去摇，摇好了后直接拿去菌液PCR，引物用16S rRNA的通用引物，扩增好了就送去测序。 不知道这样的方法是否可行，敬请高人指点，恳请大家畅所欲言。我知道这个方法存在的一个问题：首先，我挑到的单菌落有可能不是单种细菌，可能是两种甚至多种细菌，这样菌液PCR扩增出来的就不是一种片段，而是几种片段，由于我不太清楚测序的过程，这种情况下测序会测出什么结果我也无法预计。强调一点：我的目的是筛菌，不是一定要把每个都准确的测出来。 [ Last edited by 西门炊饼 on 2011-8-29 at 13:54 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
博士高校求职 安建大vs西科大
已经有12人回复
-
2024杰青和万人领军什么时候会评
已经有5人回复
-
希望嫡长子顺利出场！
已经有6人回复
-
职能部门工作人员态度不好是普遍的吗？怎么让他们态度好一些？
已经有5人回复
-
入职高校3年发表10+SCI，尽人事听天命
已经有48人回复
-
统计一下：硕士毕业答辩后的谢师宴是学生出钱，还是老师出钱？
已经有18人回复
-
哎
已经有5人回复
-
选择
已经有11人回复
-
各位同学能否分享一下实验室的学生劳务发放标准呀？
已经有19人回复
-
离职后国自然项目不能变更单位，在新单位还能申请新的国自然项目吗
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何从土壤中筛选酵母菌株，并进行相关鉴定？
已经有22人回复
- 菌种鉴定怎样选取培养基
已经有6人回复
- 微生物多样性研究的几个问题
已经有10人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 求助高人，筛菌问题，怎么选择鉴别培养基
已经有5人回复
- 关于菌株16SrDNA序列鉴定的问题
已经有4人回复
- 在基因重组过程中，怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好？
已经有10人回复
- 细菌筛选鉴定的文章，比较容易发的SCI杂志有哪些
已经有3人回复
5楼2011-08-29 21:25:56
粉靛蓝
木虫 (著名写手)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2812.5
- 散金: 564
- 红花: 5
- 帖子: 1145
- 在线: 398小时
- 虫号: 764757
- 注册: 2009-05-07
- 专业: 食品科学
2楼2011-08-29 15:50:53
西门炊饼
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 53.5
- 帖子: 26
- 在线: 12.6小时
- 虫号: 1382807
- 注册: 2011-08-29
- 性别: GG
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
3楼2011-08-29 16:40:50
粉靛蓝
木虫 (著名写手)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 2812.5
- 散金: 564
- 红花: 5
- 帖子: 1145
- 在线: 398小时
- 虫号: 764757
- 注册: 2009-05-07
- 专业: 食品科学
4楼2011-08-29 16:47:30
5