24小时热门版块排行榜    

查看: 2236  |  回复: 4

湖畔狂想

金虫 (小有名气)

[求助] 求助:酶切下来的片段比PCR片段大100多bp是怎么回事,怎么解决这个问题。 已有3人参与

我用的载体是宝生物 PMD 18-T SIMPLE VECTOR.
酶切的酶是Promega的。
PCR时,片段的位置很准确,但是和载体连完再切时,就发现切下来的片段比PCR时的大了100多。
一开始怀疑是点样的问题,于是换了1管溴酚蓝,结果仍偏大。
换用6X LOADING BUFFER ,结果略好一点点,比用溴酚蓝时小了一点,但是由于我的目的片段是693和795,即使用了6X LOADING BUFFER酶切条带仍在750mark上面。
有没有哪位前辈遇到过这种问题,求指教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-13 20:48:45
你PCR产物上带酶切位点还是利用载体上的。选两个测序看看。
hehe
2楼2014-01-13 20:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-14 08:32:42
酶切后的产物含盐量可能较高,会影响DNA的迁移率,从胶上观测的分子量未必准确。你可以继续克隆,以测序结果为准。
3楼2014-01-14 00:03:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷眼倦天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-28 17:54:09
酶切时的盐离子会影响条带的大小,这是很正常的,不是你的实验的问题,这个问题应该是经常遇到的,链接完毕之后,可以通过测序比对序列来判定结果!!
4楼2014-01-14 10:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

湖畔狂想

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-14 00:03:12
酶切后的产物含盐量可能较高,会影响DNA的迁移率,从胶上观测的分子量未必准确。你可以继续克隆,以测序结果为准。

太感谢了,您这么说给了我很大的信心!
5楼2014-01-14 10:44:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 湖畔狂想 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +7 zju2000 2026-08-16 7/350 2026-08-17 11:31 by Iktsuarpok9
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +10 Ldrop2023 2026-08-13 10/500 2026-08-17 09:59 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见