版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

湖畔狂想

金虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 771.3
散金: 5
帖子: 126
在线: 43.2小时
虫号: 2025117
注册: 2012-09-24
性别: GG
专业: 卫生管理与政策

[求助] 求助：酶切下来的片段比PCR片段大100多bp是怎么回事，怎么解决这个问题。已有3人参与

我用的载体是宝生物 PMD 18-T SIMPLE VECTOR.
酶切的酶是Promega的。
PCR时，片段的位置很准确，但是和载体连完再切时，就发现切下来的片段比PCR时的大了100多。
一开始怀疑是点样的问题，于是换了1管溴酚蓝，结果仍偏大。
换用6X LOADING BUFFER ,结果略好一点点，比用溴酚蓝时小了一点，但是由于我的目的片段是693和795，即使用了6X LOADING BUFFER酶切条带仍在750mark上面。
有没有哪位前辈遇到过这种问题，求指教。

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

90bp小片段的回收已经有16人回复
PCR和酶切实验已经有5人回复
重叠PCR引物，两个片段分别回收后存在杂带是怎么回事已经有4人回复
关于PCR引物中加入酶切位点的设计方法和酶切问题！新手，求帮忙！！已经有4人回复
PCR产物双酶切遇到问题，求救！！！已经有7人回复
Nhe I和Hind III 双酶切pcDNA3.1(+)和目的片段2300bp，却连不上，求各位帮忙啊已经有17人回复
单酶切的大片段连接转化及多个片段的连接转化问题已经有8人回复
双酶切后目的片段变大已经有11人回复
我做的基因克隆，平行的几个克隆测序后，片段比对重叠率怎么不是100% 已经有5人回复
目的片段中含有酶切位点，求解决方案已经有3人回复
小片段双酶切求助，急急急已经有18人回复
请教PCR产物酶切后是否可以直接过柱纯化而不胶回收？已经有15人回复
双酶切，切不下来已经有19人回复
小片段pcr产无割胶回收已经有10人回复
求助重叠延伸pcr 已经有5人回复
怎么计算DNA片段的大小是多少bp? 已经有4人回复
T载体酶切片段与目的片段大小不一致已经有12人回复
大片段连接问题已经有20人回复
求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段已经有5人回复
Sau 3AI 酶切DNA片段无带怎么回事？已经有7人回复
overlap PCR做不出来呐。。。。已经有23人回复
求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法已经有15人回复
高GC含量基因片段PCR问题已经有13人回复
PCR ，双酶切，连接问题已经有17人回复
129bp小片段从pGEM-T上酶切回收的问题已经有13人回复
【求助/交流】PCR产物切胶回收，总是有一条杂带的大小是目的片段的两倍大小已经有8人回复

1楼 2014-01-13 19:49:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 363 (硕士)
金币: 7753.3
散金: 15
红花: 9
帖子: 751
在线: 189.4小时
虫号: 819723
注册: 2009-07-31
性别: GG
专业: 植物遗传学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-13 20:48:45

你PCR产物上带酶切位点还是利用载体上的。选两个测序看看。

hehe

2楼2014-01-13 20:09:42

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主湖畔狂想的主题更新