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T载体酶切片段与目的片段大小不一致
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我同时做了两个T载体，两个目的片段，a是370bp左右，b是450bp左右，连接PMD18T-Vector后提质粒PCR扩增片段无误，之后进行酶切，结果切出来a是450bp左右，b是370bp左右，原以为是弄反了，结果重复两次后还是那样，以为是提完质粒标错了，结果对质粒又PCR一次，还是无误，求高人指点可能出现的问题，我两个目的片段均选用的是KpnⅠ和Xhol作为酶切位点，T载体上有KpnⅠ位点，不过距插入位点只有20多bp，检验目的片段内部没有两种酶切位点。附上引物：a上游CGG GGTACC TAAGTTTTATTAGGCTACTCA 下游CCG CTCGAG ATTTTAGAATCTTAACGCCAA b上游CGG GGTACC CTATGTATCCAGAACAGCCTAT 下游CCG CTCGAG GCGGAACAAGTATGTCAGT 用空格隔开的依次是保护碱基、酶切位点、引物。 在线等结果。 |
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