| 查看: 1854 | 回复: 12 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
T载体酶切片段与目的片段大小不一致
|
||
|
我同时做了两个T载体，两个目的片段，a是370bp左右，b是450bp左右，连接PMD18T-Vector后提质粒PCR扩增片段无误，之后进行酶切，结果切出来a是450bp左右，b是370bp左右，原以为是弄反了，结果重复两次后还是那样，以为是提完质粒标错了，结果对质粒又PCR一次，还是无误，求高人指点可能出现的问题，我两个目的片段均选用的是KpnⅠ和Xhol作为酶切位点，T载体上有KpnⅠ位点，不过距插入位点只有20多bp，检验目的片段内部没有两种酶切位点。附上引物：a上游CGG GGTACC TAAGTTTTATTAGGCTACTCA 下游CCG CTCGAG ATTTTAGAATCTTAACGCCAA b上游CGG GGTACC CTATGTATCCAGAACAGCCTAT 下游CCG CTCGAG GCGGAACAAGTATGTCAGT 用空格隔开的依次是保护碱基、酶切位点、引物。 在线等结果。 |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有50人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- T载体连接目的片段后做蓝白斑全都是假阳性
已经有6人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 酶切的相关问题
已经有7人回复
- 质粒是否需要酶切后再电泳？
已经有9人回复
- 我用的是pMAL-m2载体，片段大小连不上！
已经有3人回复
- 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白
已经有19人回复
- 【求助/交流】目的片段与载体连接不上
已经有16人回复
- 【求助/交流】双酶切的问题
已经有24人回复
5楼2012-04-24 10:07:41
chibang1220
木虫 (著名写手)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 5697.7
- 散金: 68
- 红花: 8
- 帖子: 1435
- 在线: 333.1小时
- 虫号: 1653055
- 注册: 2012-02-29
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2012-04-24 09:35:35
3楼2012-04-24 10:03:41
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
4楼2012-04-24 10:06:14
5