| 查看: 1064 | 回复: 4 | ||||
a406331686银虫 (小有名气)
|
[求助]
全长PCR扩增的非特异性条带去不掉咋办 已有3人参与
|
上下引物的TM值分别为43.6和48.2，我用的是44度每个循环降0.5度，一共降12个循环，然后再用38度，跑20个循环，可是电泳后发现目的条带（1000bp处）有，但是没有750bp处的非特异性条带清楚，而且升高退火温度也没作用，求大神指点···· CAD4_副本.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有116人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 竞争性等位特异性PCR扩增不出条带
已经有8人回复
- PCR 扩增条带大小不对
已经有10人回复
- Marker条带问题及引物二聚体
已经有13人回复
- PCR扩增空白有条带
已经有13人回复
- PCR扩增DNA序列无条带
已经有46人回复
- PCR产物非特异性条带的去除
已经有14人回复
- 欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！
已经有25人回复
- PCR扩增出来的条带,与预计大小一致,测序居然什么都不是????
已经有4人回复
- PCR扩增 非特异性条带求解
已经有5人回复
- 16srRNA基因PCR扩增条带总出现在最下方什么原因？
已经有13人回复
- PCR扩增不出目的条带
已经有12人回复
- qPCR总出现非特异性扩增，到底是怎么回事？
已经有19人回复
- PCR扩增的特异性条带是啥意思？
已经有9人回复
- PCR出现非特异性扩增，求高手解答
已经有9人回复
- RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来
已经有14人回复
- PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
已经有4人回复
- 基因组dna检测条带很亮 PCR扩增后条带非常弱 求助
已经有3人回复
- 相同条件的pcr产物，跑出不同的条带，是什么原因[/img][/img][/img]
已经有12人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- PCR非特异性扩增
已经有6人回复
- 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
已经有24人回复
- 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因
已经有13人回复
biostar2009
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +220 - MolEPI: 20
- 应助: 231 (大学生)
- 金币: 10387.9
- 散金: 387
- 红花: 63
- 帖子: 540
- 在线: 151.9小时
- 虫号: 2811882
- 注册: 2013-11-19
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
a406331686: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-25 10:19:20
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-25 10:42:04
感谢参与，应助指数 +1
a406331686: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-03-25 10:19:20
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-25 10:42:04
|
TM值分别为43.6和48.2 引物的Tm低到40oC，你每条引物各有多少个碱基？ PCR的引物不仅仅要考虑Tm，还要考虑碱基数，因为本质上控制特异性的是碱基长度， 对于人的基因组，引物一般要求至少19个碱基，如果Tm再很低，继续延长，如果Tm已经很高了，为了保证引物的“复杂度”，也应该保持在19个碱基以上。 不然错配是必然的。 但是你这个情况可能比较特殊，你是做克隆， 做克隆只要有自己要的条带就行了 关键是你那个目的条带是不是你要的 如果是的，你就想办法纯化回来一点，再P好了 |
2楼2014-03-25 09:22:38
a406331686
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 59.2
- 散金: 500
- 红花: 2
- 帖子: 58
- 在线: 87.4小时
- 虫号: 3004413
- 注册: 2014-02-28
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
3楼2014-03-25 10:10:47
liuderong
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 310 (大学生)
- 金币: 8202.1
- 红花: 31
- 帖子: 582
- 在线: 142.1小时
- 虫号: 1882145
- 注册: 2012-07-07
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2014-03-25 12:09:00
shen_41745
金虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 1248.9
- 红花: 1
- 帖子: 128
- 在线: 49.1小时
- 虫号: 931201
- 注册: 2009-12-20
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2014-03-26 09:36:25
