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a406331686银虫 (小有名气)
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[求助]
全长PCR扩增的非特异性条带去不掉咋办 已有3人参与
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上下引物的TM值分别为43.6和48.2，我用的是44度每个循环降0.5度，一共降12个循环，然后再用38度，跑20个循环，可是电泳后发现目的条带（1000bp处）有，但是没有750bp处的非特异性条带清楚，而且升高退火温度也没作用，求大神指点···· CAD4_副本.jpg |
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a406331686
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3楼2014-03-25 10:10:47
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TM值分别为43.6和48.2 引物的Tm低到40oC，你每条引物各有多少个碱基？ PCR的引物不仅仅要考虑Tm，还要考虑碱基数，因为本质上控制特异性的是碱基长度， 对于人的基因组，引物一般要求至少19个碱基，如果Tm再很低，继续延长，如果Tm已经很高了，为了保证引物的“复杂度”，也应该保持在19个碱基以上。 不然错配是必然的。 但是你这个情况可能比较特殊，你是做克隆， 做克隆只要有自己要的条带就行了 关键是你那个目的条带是不是你要的 如果是的，你就想办法纯化回来一点，再P好了 |
2楼2014-03-25 09:22:38
liuderong
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