| 查看: 4219 | 回复: 7 | ||
tayifeita木虫 (小有名气)
|
[求助]
蓝白斑筛选都是 假阳性
|
|
我用phusion高保真酶扩一个2kb的目的片段，切胶回收后用30微升产物和30微升 taq mix以1比1的比例混合，72摄氏度加A尾20分钟。然后用pcr回收试剂盒回收。接下来用这次回收的目的片段4.5微升，PMD18-T 0.5微升和solution 1 .总共体系10微升酶连过夜。第二天来就做转化。涂在蓝白斑平板上后挑40个白斑进行菌落pcr。用m13引物。都没检测出条带。希望虫友们能帮忙分析下原因 [ Last edited by tayifeita on 2013-9-18 at 16:21 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有117人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蓝白斑筛选白色菌落PCR无条带
已经有12人回复
- 蓝白斑筛选没有菌落，或者都是白斑，是什么情况
已经有9人回复
- 第一次做蓝白斑筛选，培养12h后无斑
已经有9人回复
- 蓝白斑筛选没问题，挑白色克隆测序无目的基因序列
已经有9人回复
- 请教一下，这是否为假阳性克隆的问题，如果是，该如何提高阳性克隆效率？
已经有20人回复
- 我有几个克隆和基因重组的基本问题不太清楚，请各位帮帮忙！
已经有6人回复
- 菌液PCR产物电泳图，怎么解释？
已经有12人回复
- 转化大肠杆菌平板出现卫星菌落是怎么回事？
已经有12人回复
- 蓝白斑筛选什么都没长，不是感受态的问题。真诚求助高手解答！
已经有15人回复
- 蓝白斑筛选 菌落成串
已经有15人回复
- 构建克隆载体时出现的问题
已经有11人回复
- 蓝白斑筛选只长白斑
已经有10人回复
- 大肠杆菌连接转化假阳性很多
已经有5人回复
- Amp、IPTG和X-gal的使用
已经有12人回复
- 蓝白斑筛选时IPTG，Xgal，Amp的用量
已经有14人回复
- PBS-T载体连接
已经有4人回复
- 克隆假阳性的问题
已经有3人回复
- PCR产物与T载体连不上 求助
已经有29人回复
- X—Gal IPTG蓝白斑试验
已经有8人回复
- 【求助】T载体转化DH5α，平板上没有斑
已经有20人回复
- 【求助/交流】菌落PCR扩出来的片段不是目的片段，咋办啊？？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选
已经有9人回复
- 【求助/交流】蓝白斑筛选
已经有8人回复
- 【求助/交流】假阳性是什么原因造成的？
已经有7人回复
2楼2013-09-18 16:29:37
tayifeita
木虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 1894.1
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 106
- 在线: 70.6小时
- 虫号: 1719459
- 注册: 2012-03-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2013-09-18 16:38:40
4楼2013-09-18 17:31:28
yyw09030126
铜虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 209.8
- 散金: 365
- 帖子: 126
- 在线: 61.3小时
- 虫号: 1540233
- 注册: 2011-12-16
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2013-09-20 22:54:13
夏天的普洱茶
木虫 (著名写手)
- 应助: 69 (初中生)
- 金币: 5116.5
- 红花: 18
- 帖子: 1048
- 在线: 441.4小时
- 虫号: 1427657
- 注册: 2011-10-05
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2013-09-21 15:49:16
7楼2013-10-10 22:39:07
tayifeita
木虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 1894.1
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 106
- 在线: 70.6小时
- 虫号: 1719459
- 注册: 2012-03-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2013-10-14 18:43:35
6