应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后细菌提质粒，PCR条带很诡异
151/2返回列表12下一页
查看: 2836  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 转化后细菌提质粒，PCR条带很诡异

从板上挑的菌落都长的不是很好，基本上就只有几个菌落，挑完接种提质粒后PCR，发现条带只有100bp，目的基因有1000bp左右，而且还加了myc，为什么PCR之后就只有100bp了呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-22 17:26:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sars37(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-22 20:08:33
为什么不先用colony PCR确认之后，再提质粒，质粒提了之后，浓度是多少，有可能浓度高了，建议稀释一定倍数后再来PCR。并建议在质粒提取后做酶切，这样也能判断目的基因是否插入，插入方向是否正确
赞一下(2人) 回复此楼
越学越无知
2楼2013-07-22 19:58:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sars37: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-07-23 10:43:29
估计是引物二聚体
应该是假阳性
建议菌落PCR，才接种提质粒
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-07-22 20:48:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sars37(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-22 21:06:43
sars37: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-07-23 10:43:21
一般来说，1kb左右的片段，连接正常转换正常的话，不应该只有几个点
结果告诉你连接不是很成功，重新做连接转化了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-07-22 20:48:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
觉得是没有连上，重新酶切、连接、转化。
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-23 00:46:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sars37

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lwiaanngg at 2013-07-22 20:48:58
一般来说，1kb左右的片段，连接正常转换正常的话，不应该只有几个点
结果告诉你连接不是很成功，重新做连接转化了

你好，这个实验已经重复几次了，每次涂板后长出的菌落都不是均匀分布在板上，是集中在边缘，菌落连在一起，然后我挑的是在边缘上独立出来的几个菌落。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-23 10:41:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sars37

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 84146922 at 2013-07-22 20:48:52
估计是引物二聚体
应该是假阳性
建议菌落PCR，才接种提质粒

是把菌落划一半 另一半PCR吗？
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-23 10:43:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sars37

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-23 00:46:11
觉得是没有连上，重新酶切、连接、转化。

你好，我想请问我涂板后的菌落只是在边缘长出来，而且都连在一起，我是挑了几个独立出来的做，这种情况可能是什么问题呢？
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-23 11:43:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

追梦的人1987

金虫 (小有名气)
应该是空载
回复此楼
9楼2013-07-23 11:45:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sars37 at 2013-07-23 10:43:00
是把菌落划一半 另一半PCR吗？...

用牙签轻轻沾点去PCR就可以了
如果怕沾多了，可以先用牙签沾到加有5微升的无菌水的灭绝PCR管内
再吸0.5微升去进行PCR
赞一下 回复此楼
10楼2013-07-23 12:51:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sars37 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然评审意见 +8 wangmingqi 2026-08-28 9/450 2026-08-28 20:57 by Tide man
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 17:09 by winsaint
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +3 bud_bud 2026-08-27 6/300 2026-08-28 11:53 by bud_bud
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭